[发明专利]预防猪感染猪繁殖与呼吸综合征的减毒活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种预防猪感染猪繁殖与呼吸综合征的减毒活疫苗。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome， PRRS)是由PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory SyndromeVirus，PRRSV)引起的一种猪传染病。临床症状以母猪繁殖障碍 和仔猪呼吸困难为特征。发病初期均表现为发热、嗜睡、食欲不振、倦怠、 呼吸困难、咳嗽等。该病最早发现于在美国的北卡罗来纳州(1987年)，此 后相继在加拿大(1998)、德国(1990)、英国(1991)发现此病。1992年 国际兽疫局(OIE)将此病命名为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。我国于1996 年也报道了此病的流行。PRRSV共分为两种基因型：美洲型和欧洲型。并 且抗原分型与基因分型基本一致。两型之间存在比较大的抗原差异。

PRRS的流行给世界养猪业造成了巨大的经济损失。因此预防PRRS 越来越得到各国从业者的重视。其中疫苗预防已经取得了一定的进展。 灭活疫苗是较早研制的疫苗，其不存在散毒和毒力返强的危险.但是对于以 细胞免疫为主的PRRSV预防效果不是很理想。

美国Boehringer Ingleheim公司于1995年首次推出减毒活疫苗Resp PRRS/Repro^TM，并获准用于3-18周的健康青年母猪、经产母猪、哺乳仔猪 和生长育肥猪，免疫期4个月以上。Schering-Plough动物保健公司生产的弱 毒疫苗Prime Pac^RPRRS，用于母猪或后备母猪配种前3-6周的预防接种， 取得了较好的预防效果。但是，PRRSV极易发生变异，导致减毒疫苗在临 床上的预防效果不甚理想，也是猪场复发PRRS的主要原因。

2006年我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征，引起该次疫病爆 发的病原为发生了变异的PRRSV，与以往流行PRRS毒株相比存在较大 程度变异，因此，需要研发出针对导致我国PRRS流行的毒株的减毒活 疫苗，以有效地防止我国PRRS的流行。

发明内容

基于现有技术存在的技术缺点，本发明的目的在于提供能有效预防PRRS 在中国流行地区的发生。为达到本发明的目的，发明人从一株分离于天津某 猪场的猪繁殖与呼吸综合征病毒的PRRSV TJ株出发，并进行减毒培养，从而 获得了符合本发明要求的减毒疫苗株，从而本发明提供了：

一种猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒活疫苗株TJM，其微生物保藏号为 CGMCC No.3121；分类命名：猪繁殖与呼吸综合征病毒；保藏地址是：北京 市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所；保藏单位是：中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间是2009年6月15日；

本发明还提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒活疫苗株，其特征在 于，其Nsp2核苷酸序列全长为2490bp，与PRRSV TJ株(GenBank登录号为 EU860248)Nsp2核苷酸序列相比连续缺失第598-717位氨基酸，共缺失120 个氨基酸；与VR-2332毒株Nsp2核苷酸序列相比，缺失第481位、第537-565 位和628-747位氨基酸，共缺失150个氨基酸，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所 示。

本发明进一步提供了一种制备上述疫苗株的方法，所述方法包括将微生 物保藏号为CGMCC NO.2129的PRRSV TJ株在细胞中传代，每10代进行噬 斑克隆纯化，使所述毒株的毒力致弱得到致弱毒株，而得到所述疫苗株。

在本发明的一个优选实施方案中，在上述制备疫苗株的方法中，所述细 胞为Marc-145细胞或相关可用于PRRSV生长的细胞。

在本发明的一个优选实施方案中，所述Marc-145细胞或相关可用于 PRRSV生长的细胞按照以下任意一种方法培养得到：

(1)在转瓶中培养Marc-145细胞或相关可用于PRRSV生长的细胞，使 细胞密度达到5-10×10⁷/ml；

(2)在生物反应器中添加附着载体的悬浮培养或无载体的悬浮培养，使 Marc-145细胞或相关可用于PRRSV生长的细胞密度达到 5-10×10⁷/ml--5-10×10⁸/ml。