[发明专利]固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学诊断技术领域，是一种固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，该敏感膜可准确、快速、定量检测出人体脑钠肽的含量。

背景技术

随着人们生活水平的提高、生活节奏加快和心理压力增大，心衰的发病率逐年上升，已成为现代社会常见病。专家指出，在各种心脑血管意外中，要特别警惕心衰，因为心衰对心脏的损害不可逆转。要预防心衰，最好的办法是早发现早治疗。但从目前来看，因为心衰无明显临床症状，50％的心衰患者未能及时确诊，等发现患病时，已经非常严重。专家建议心衰发病的高危人群(心脏病、高血压、糖尿病、血脂异常患者以及肥胖者)，最好每年做一次脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)检查，以便在心衰早期及时干预。当心功能不全时，由于心脏容量负荷或压力负荷增加，会使血中脑钠肽浓度增高，因此，脑钠肽成为检测心衰状况的敏感指标。但脑钠肽水平的测定并没有得到很好的普及，主要原因是受检测方法的制约。为了适应这一需求，无论是基于实验室还是基于临床的很多检测方法都必须加以改进、优化。目前，我国对脑钠肽的检测主要依靠进口仪器和试剂，随之带来的检测费用也大幅度增加。因此，研制一种灵敏度高、准确度好、可快速检测脑钠肽浓度的光学敏感膜，来降低脑钠肽检测成本，使脑钠肽检测易于在国内普及，适合我国国情。该技术具有巨大的发展潜力和应用前景。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术的不足，提供一种固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，该方法制备的光学敏感膜能定量检测脑钠肽的含量，成本低廉、准确可靠、分析速度快。

为达到上述目的，本发明的技术解决方案是：

一种固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其将载体表面进行醛基化处理后，固定脑钠肽捕获抗体，用卵清蛋白将未固定脑钠肽捕获抗体的醛基封闭，利用抗原抗体反应，将脑钠肽抗原分子的C-端区与脑钠肽捕获抗体结合，用酪蛋白将未结合脑钠肽抗原的脑钠肽捕获抗体进行封闭，在脑钠肽抗原分子内环结构端结合标记有荧光量子点的脑钠肽检测抗体；其包括步骤：

(1)制备荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体；

(2)将载体表面氨基化；将氨基化的载体进行双功能试剂的交联，使其表面形成活化的醛基；

(3)将脑钠肽捕获抗体固定在载体上；

(4)采用卵清蛋白将载体上未参与反应的醛基封闭；

(5)在载体上滴加待测脑钠肽样品溶液，37℃水浴10～120分钟；

(6)采用酪蛋白将未与待测样品中脑钠肽抗原结合的脑钠肽捕获抗体进行封闭；

(7)在载体上加入(1)步制备的荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体，37℃水浴5～60分钟，形成固相抗体-抗原-荧光量子点标记检测抗体的复合物；

(8)用PBST洗涤，去掉多余的未参与反应的荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体溶液；

(9)冲洗，晾干，制成成品。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述步骤(2)中，载体表面醛基化处理，所用试剂为氨基硅烷和戊二醛；先用氨基硅烷进行氨基化反应，然后用戊二醛进行醛基化反应，在载体表面形成活化的醛基，与脑钠肽捕获抗体的氨基进行缩合反应，形成共价键。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述步骤(3)，是将可以识别脑钠肽分子C-端区的脑钠肽捕获抗体滴加于醛基化的载体表面，在37℃水浴中放置30～120分钟，然后用洗液和缓冲液冲洗，晾干。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述步骤(4)，是在固定脑钠肽捕获抗体的光学敏感膜上滴加1％～10％的卵清蛋白封闭液，封闭没反应的醛基，在37℃水浴中放置60分钟后，用蒸馏水冲洗，晾干。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述步骤(6)，是加入酪蛋白溶液封闭60分钟，双蒸水清洗，晾干。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述载体，为玻璃片、金属片、PC板材、有机高分子薄膜其中之一。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述脑钠肽捕获抗体，为单克隆抗体，该抗体可以识别脑钠肽分子的C-端区；标记有荧光量子点的脑钠肽检测抗体，可以识别脑钠肽分子内环结构，即脑钠肽捕获抗体与脑钠肽检测抗体能识别脑钠肽抗原的不同表位形成双抗体夹心复合物，通过光源激发荧光量子点发光来检测脑钠肽含量。

所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其所述荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体，其中使用的荧光量子点是CdSe、CdS、ZnS、InP、InAs及其核壳结构中的一种或几种。