[发明专利]固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法

权利要求书

1.一种固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，将载体表面进行醛基化处理后，固定脑钠肽捕获抗体，用卵清蛋白将未固定脑钠肽捕获抗体的醛基封闭，利用抗原抗体反应，将脑钠肽抗原分子的C-端区与脑钠肽捕获抗体结合，用酪蛋白将未结合脑钠肽抗原的脑钠肽捕获抗体进行封闭，在脑钠肽抗原分子内环结构端结合标记有荧光量子点的脑钠肽检测抗体；其包括步骤：

(1)制备荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体；

(2)将载体表面氨基化；将氨基化的载体进行双功能试剂的交联，使其表面形成活化的醛基；

(3)将脑钠肽捕获抗体固定在载体上；

(4)采用卵清蛋白将载体上未参与反应的醛基封闭；

(5)在载体上滴加待测脑钠肽样品溶液，37℃水浴10～120分钟；

(6)采用酪蛋白将未与待测样品中脑钠肽抗原结合的脑钠肽捕获抗体进行封闭；

(7)在载体上加入(1)步制备的荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体，37℃水浴5～60分钟，形成固相抗体-抗原-荧光量子点标记检测抗体的复合物；

(8)用PBST洗涤，去掉多余的未参与反应的荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体溶液；

(9)冲洗，晾干，制成成品。

2.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，载体表面醛基化处理，所用试剂为氨基硅烷和戊二醛；先用氨基硅烷进行氨基化反应，然后用戊二醛进行醛基化反应，在载体表面形成活化的醛基，与脑钠肽捕获抗体的氨基进行缩合反应，形成共价键。

3.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)，是将可以识别脑钠肽分子C-端区的脑钠肽捕获抗体滴加于醛基化的载体表面，在37℃水浴中放置30～120分钟，然后用洗液和缓冲液冲洗，晾干。

4.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)，是在固定脑钠肽捕获抗体的光学敏感膜上滴加1％～10％的卵清蛋白封闭液，封闭没反应的醛基，在37℃水浴中放置60分钟后，用蒸馏水冲洗，晾干。

5.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)，是加入酪蛋白溶液封闭60分钟，双蒸水清洗，晾干。

6.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述载体，为玻璃片、金属片、PC板材、有机高分子薄膜其中之一。

7.如权利要求1所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述脑钠肽捕获抗体，为单克隆抗体，该抗体可以识别脑钠肽分子的C-端区；标记有荧光量子点的脑钠肽检测抗体，可以识别脑钠肽分子内环结构，即脑钠肽捕获抗体与脑钠肽检测抗体能识别脑钠肽抗原的不同表位形成双抗体夹心复合物，通过光源激发荧光量子点发光来检测脑钠肽含量。

8.如权利要求1或7所述的固定人体脑钠肽的光学敏感膜的制备方法，其特征在于，所述荧光量子点标记的脑钠肽检测抗体，其中使用的荧光量子点是CdSe、CdS、ZnS、InP、InAs及其核壳结构中的一种或几种。