[发明专利]大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法。

背景技术

大黄具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经之功效。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌扑损伤，外治水火烫伤；上消化道出血。是临床上一味用量大，使用频率高的中药材。文献报道，大黄主含大黄蒽醌类成分，以游离蒽醌、结合蒽醌和总蒽醌等多型体存在。游离蒽醌代表性成分是大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚等，结合蒽醌则是游离蒽醌与各种糖以不同的连接方式形成的苷类。游离蒽醌具抗菌、消炎作用，而结合蒽醌具泻下作用。科学合理的质量控制方法应是分别控制不同型体的蒽醌含量，质量控制标准才更有意义。但目前不论中国药典还是地标升国标等法定标准收载的数百种含大黄的复方制剂，其质量控制标准存在着较大缺陷。第一，不论功效是泻下通便还是抗菌消炎，其质量标准都是以大黄酚、大黄素计的总蒽醌量。总蒽醌量高，不能反映具消炎作用的游离蒽醌含量高，同理也无法反映具泻下作用的结合蒽醌含量高，甚至出现作为抗菌消炎的制剂结合蒽醌远高于游离蒽醌的情况。总之质量控制的成分与功效不挂钩。第二，质控方法太繁琐、复杂，需用多量毒害溶剂纯化处理，费时长，成本高、效率低、污染环境，危害健康。第三，流动相的耐用性试验不符合规定，部分色谱柱大黄素波峰包覆杂质峰，且很难辨认分离(见图1)，导致测定结果的误判，直接影响制剂安全性与有效性的正确评价。将目前有关大黄的质量控制方法归纳、分析如下：

方法1取样品，剪碎，精密称取一定量，加上一定量的硅藻土，研匀，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置烧瓶中，水浴蒸至近干，加盐酸-30％乙醇(1∶10)混合溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干，残渣用甲醇溶解，转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定大黄素、大黄酚的总量(中国药典05年版麻仁丸、麻仁润肠丸等含量处理方法)。流动相：甲醇-0.1％磷酸(85∶15)。

方法分析：本测定方法仅硅藻土研磨与索氏提取至无色就要花费时间大约7～8个小时，而且样品与硅藻土研匀后，必须全部定量转移置索氏提取器中，否则，黏附在乳钵和乳锤上的样品，要带来测定误差。研细的样品与硅藻土在提取时，易形成致密层，阻止了溶剂的穿透，易造成提取不完全，进而影响结果的准确性。提取完成后，再取一定量溶液，蒸干、水解、三氯甲烷萃取、再蒸干、定容，仅样品前处理就花费时间约14～15小时，其中同时消费电能与水资源的时间达10小时以上，有机毒害试剂数百毫升。方法繁琐、费时、效率低、成本高、污染环境、危害检验人员健康，方法准确性欠佳。

方法2.取样品，剪碎，精密称取一定量，置烧杯中，加一定量水，温热，搅拌使溶散，加一定量硅藻土，拌匀，置烘箱中烘干，转移置锥形瓶中，并用一定量水洗涤烧杯及玻棒，洗液并入锥形瓶中，置烘箱中烘干，精密加入盐酸-乙醇(1∶25)混合溶液25ml，称定重量，超声处理10分钟。置水浴加热回流2小时，放冷，再称定重量，用盐酸-乙醇(1∶25)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，测定大黄素、大黄酚的总量(中国药典05年版清宁丸含量处理方法)。流动相：甲醇-0.1％磷酸(85∶15)。

方法分析：本方法虽然无毒害试剂萃取，但程序显得仍较繁琐、复杂，费时。如温热，搅拌，硅藻土拌匀，烘箱烘干，转移，再烘干，水解，蒸干，定容等，样品前处理大约需花费2天时间，而且步骤越多，越易出现测定误差。