[发明专利]以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌重组腺病毒和构建方法及用途

权利要求书

1、一种用于产生siRNA的DNA序列组，包括如下四个序列：

DNA序列1

5‘-CTCGAGTTTATTAGCTCAAAAAAGAAACCCAGCAGACAATGTAGCT-3’

DNA序列2

5’-CTCGAGTTTATTAGCTCAAAAAAGAAACCCAGCAGACAATGTAGCT-3`

DNA序列3

5′-CACCGGATCCATTGTCTGCTGGGTTTCTTTTTTGAATAAAGAGCTC-3’

DNA序列4

5’-CTCGAGTTTATTAGCTCAAAAAAGAAACCCACAGACAATGGATCC-3’。

2、一种包含权利要求1所述的DNA序列组的真核表达质粒。

3、一种权利要求2所述的真核表达质粒的构建方法，其特征在于将序列表中的SEQ IDNO.1/SEQ IDNO.2、SEQ IDNO.3/SEQ IDNO.4退火形成双链结构，通过亚克隆连接于质粒载体用以构建真核表达质粒，获得以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌重组质粒。

4、一种基于反义RNA技术的、以肿瘤细胞miR-221/222为药靶包含权利要求1所述的DNA序列组的腺病毒穿梭载体，其特征是联合应用2个反义RNA序列，在U6启动子下游分别连接反义的miR-221和miR-222成熟序列的表达模扳，所述的2个反义RNA序列采用：序列表中的DNA序列1/DNA序列2，DNA序列1为正义链、DNA序列2为反义链，DNA序列3/DNA4序列，DNA序列3为正义链、DNA序列4为反义链。

5、一种权利要求4所述的腺病毒穿梭载体的构建方法，其特征在于将序列表中的SEQ IDNO.1/SEQ IDNO.2、SEQ IDNO.3/SEQ IDNO.4退火形成双链结构，通过亚克隆连接于穿梭载体，获得以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌腺病毒穿梭载体。

6、一种基于反义RNA技术的、以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌重组腺病毒，其特征在于该腺病毒是在pGSadeno基因组多克隆位点下游分别插入针对人源性和小鼠源性U6启动子，在U6启动子下游连接反义的miR-221和miR-222成熟体RNA序列构成，所述的序列是：

反义miR-221成熟序列的RNA序列：5‘-GAAACCCAGCAGACAAUGUAGCT-3’

反义miR-222熟序列的RNA序列：5‘-GAAACCCAGCAGACAATGGAUCC-3’。

7、一种权利要求6所述的重组腺病毒的构建方法，其特征在于，首先按照权利要求5所述的方法构建权利要求4所述的腺病毒穿梭载体，然后LR体外同源重组至pGSadeno腺病毒载体，线性化腺病毒DNA后转染293包装细胞，获得以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌重组腺病毒。

8、权利要求6所述的重组腺病毒在制备抑制肿瘤生长药物中的用途。

9、权利要求2所述的真核表达质粒在制备抑制肿瘤生长药物中的用途。