[发明专利]一种结核分枝杆菌基因表达文库的构建方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域。具体涉及一种结核分枝杆菌基因表达文库的构建方法及应用。

背景技术

Robert Koch首次成功分离培养了结核分枝杆菌，从而为战胜世界上一个主要的瘟疫带来了巨大的希 望。然而125年过去了，结核分枝杆菌仍然是一个分布广泛的病原菌，感染了近三分之一的人类并且每年 杀死约两百万人(Raviglione M C.The TB epidemic from 1992 to 2002.Tuberculosis(Edinb)，2003， 83：4-14.)。结核分枝杆菌具有一些难以治愈的特征。它能够适应种种不利的生存环境并且能够阻止正常 巨噬细胞的成熟。结核分枝杆菌还能够进入休眠状态，使得感染并不表现出症状，在体内一直潜伏数十年。 当宿主的免疫系统由于营养不良，患病或者年老的而变得衰弱，潜伏的结核杆菌就有可能复活(Smith I. Mycobacterium tuberculosis pathogenesis and molecular determinants of virulence.Clin Microbiol Rev，2003，16：463-496.)。

作为一个古老的致病菌，针对它的预防措施和诊断方法却是几十年没有更新。大量数据表明卡介苗 (BCG)接种对儿童的保护效果较明显，但对成人的免疫效果极不稳定(Brosch R et al.Genome plasticity of BCG and impact on vaccine efficacy.Proc Natl Acad Sci USA，2007，104：5596-5601.)。即 使对于儿童，BCG的免疫保护效果在不同地区不同种族中也存在显著差异(0～80％)。BCG的局限性推动 了抗结核病新疫苗的开发。找到更好的保护性抗原，发展安全、高效的新型结核病疫苗势在必行。在诊断 方面，目前存在敏感性较低，特异性较差，操作复杂，检测周期长等问题，因此找到更多的特异性抗原， 开发研制快速特异诊断结核病的方法，成为控制结核病蔓延的首要任务。由于临床耐药菌株的出现，研究 细菌耐药机制，并针对耐药菌寻找新药靶，开发新型抗结核药物也已迫在眉睫。同时抗原一般都是细胞壁 的重要组成部分或者是分泌蛋白，有些还承担着重要的细胞代谢过程。因此抗原也是非常合适的候选药物 靶标。本发明通过外源表达结核分枝杆菌的蛋白质，利用血清学技术鉴定出新的保护性抗原，在建立新的 免疫预防方法、诊断检测方法以及新药的开发等领域都具有重要的应用价值。