[发明专利]以显色剂为样品载体并可重复加样的免疫层析法及装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫层析法，特别是涉及一种以显色剂为样品载体并可重复加样的 免疫层析法及装置。

背景技术

在刚过去的半个世纪里，大多数的免疫检测需要昂贵分析设备和仪器，并且要专业 人员操作检测。虽然这些昂贵的检测方法具有很高的灵敏度和特异性，但却因为昂贵、 不方便携带、专业性等原因，而无法满足人们健康保障的日常需求。

胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一 种简易快速的免疫学检测技术，由Beggs等最先用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测 定。GICA是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体，利用微孔膜的毛细管作用，使滴加在膜 条一端的液体慢慢向另一端渗移，如同层析一般。免疫金复合物干片粘连在近NC膜条 下端(c)，膜条测试区(t)包有特异抗体，当试纸条下端进入液体标本样中，下端吸 水材料吸取液体向上端移动，流经c处时，使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向 膜条渗移，若标本有特异性抗原时，可与免疫金复合物的抗体结合，形成的金标抗原- 抗体复合物流至测试区，被固相抗体所捕获，形成抗体-抗原-金标抗体复合物，在膜上 t处出现红色控制线。胶体金可以以乳胶和荧光等显色剂代替。

现有市面上大多的免疫层析法的产品，其中一种方法是采用冻干的显色剂片，测试 时，将一定量的待测样品加于试纸条末端，待测液体会由于毛细作用向吸水纸方向移动， 经过冻干的显色剂片处，使之复溶，并产生免疫反应，形成抗体-抗原复合物，一起进 入硝酸纤维膜后，于膜上包被有的抗体/抗原进行反应并产生肉眼可见的结果。这种方 法操作简便，但由于采用冻干的显色剂片，对于储存有一定的要求，必须要储存在密封 性良好的铝箔袋中，且一旦打开受潮即丧失功效。另外由于加入的待测样品要起到复溶 冻干显色剂和带动复合物在固相膜上移动的作用，样品用量会比较大。

而现有的小部分不采用冻干显色剂片方法进行测试的，进行测试的方法可以是先加 显色剂，采用样品带动显色剂移动(该方法和采用冻干方法是类似的，只是显色剂为液 态状态)；另一种为将样品先加于固相薄膜上，等样品流经反应区域后，再加入足量的 显色剂，从而发生显色反应。后一种方法可参考申请号为200510027710.4的专利申请。 前一种方法依然需要使用较大量的样品。后一种方法样品量较前一种略少，但由于样品 直接先加于固相膜上，由于固相膜的吸附作用，其样品的有效使用率一定会有所下降， 对反应的灵敏度也会产生一定的影响。另外，由于显色剂被加在样品之后，其流经反应 区需时较长，因而显色反应的发生也较缓慢。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种以显色剂为样品载体并可重复加样的免疫 层析法及其装置。该方法及其装置与上述方法相比，可提高测试效率(即在单位时间内 和以特定检测试剂量用更少样品量达到更高灵敏度)并可重复加样。本发明的方法在原 有的层析方法的基础上，通过显色剂较样品先一步进入硝酸纤维膜并携带样品进入反应 区，使样品的用量减少，判读的时间缩短，单位时间内的灵敏度提高，并且使重复加样 以提高灵敏度的方案可行。

为解决上述的技术问题，本发明的以显色剂为样品载体并可重复加样的免疫层析 法，步骤包括：

(1)按常规方法制备试剂条

该试剂条由背衬(塑料板或硬化板)、硝酸纤维膜、吸水纸和玻璃纤维膜组成，硝 酸纤维膜上按层析方向依次由加样区、测试区和质控区组成，加样区与一玻璃纤维膜通 过略微重叠而相接，测试区上包被待测样品对应的抗原/抗体，质控区包被有相应待测 样品的质控试剂(包括蛋白、抗原、抗体等)，玻璃纤维膜上有显色剂加样区；

(2)按照常规方法制备显色剂，并以一定比例将待测样品对应的抗原/抗体与显色 剂混合，形成显色剂混合物；

(3)加入50μl～5ml的显色剂混合物于试剂条的显色剂加样区；

(4)当显色剂进入硝酸纤维膜的加样区域时，于加样区显色剂后加入5μl～100μl 待测样品，在1～30分钟内判读结果，在此期间，如有需要可以重复加样。