[发明专利]一种高稳定性的重组羧肽酶B的生产及应用有效
| 申请号： | 200910055492.3 | 申请日： | 2009-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN101967467A | 公开（公告）日： | 2011-02-09 |
| 发明（设计）人： | 冯矗;赵致 | 申请（专利权）人： | 上海雅心生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/70;C07K14/47;C12N15/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静;范征 |
| 地址： | 200231 上海市嘉定*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 稳定性 重组 羧肽酶 生产 应用 | ||
1.一种生产重组羧肽酶B的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)重组表达N端带有突变的前导序列的羧肽酶B，获得包涵体形式的重组蛋白；
(2)将步骤(1)获得的包涵体形式的重组蛋白进行变性和复性，获得可溶性重组蛋白；和
(3)切除所述步骤(2)获得的可溶性重组蛋白N端带有突变的前导序列的羧肽酶B的前导序列，获得重组羧肽酶B。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第19位突变为Asp；或
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第34位突变为Gln；或
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第55位突变为Arg；或
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第1-5位的一个或多个氨基酸缺失。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，用胰蛋白酶处理所述N端带有突变的前导序列的羧肽酶B的前导序列，从而切除所述突变的前导序列。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在处理时胰蛋白酶与所述N端带有突变的前导序列的羧肽酶B的质量比是1∶(5-15)。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用大肠杆菌重组表达融合蛋白。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，采用8±2M的尿素进行变性。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)之后，还包括：将获得的重组羧肽酶B在4±2℃；20±10％(v/v)甘油中保存。
8.一种突变的前导序列，其特征在于，所述的突变的前导序列对应于SEQID NO：2所示的氨基酸序列，其中第19位突变为Asp；或
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第34位突变为Gln；或
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第55位突变为Arg；
所述的突变的前导序列对应于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其中第1-5位的一个或多个氨基酸缺失。
9.权利要求8所述的突变的前导序列的用途，其特征在于，用于与羧肽酶B的N端连接，促进羧肽酶B的重折叠。
10.一种核酸，其特征在于，所述的核酸编码权利要求8所述的突变的前导序列。
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