[发明专利]RBP4杂交瘤细胞株及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种杂交瘤细胞株及其制备方法和用途。

背景技术

视黄醇结合蛋白(retinol-binding protein，RBP)为血中维生素A(VitA)的特异转运蛋白。RBP为低分子量蛋白，能自由滤过肾小球，近端肾小管几乎完全重吸收，其在血尿中变化与肾脏疾病密切相关。RBP以肝脏合成为主，血清、脑脊液、尿及其他体液为辅。目前已发现七种不同的RBP亚型，主要分布于血液循环系统(RBP4，简称RBP)、细胞(RBP1，RBP2，RBP5，RBP6，RBP7，简称RBPs)和视网膜光感受器间(RBP3，简称IRBP)。

RBP4(NM_006744)为一种单一肽链蛋白质，含有184个氨基酸残基和3个二硫键，有一个结合一分子全反式视黄醇的结合点。RBP4分子量为21000，沉降系数2.13～2.30，等电点为pH 4.4～4.8，半衰期约为3～12小时，合成率为每天每公斤体重5mg。RBP4在肝脏合成，受到全反式视黄醇刺激后分泌出来，释放入血液后与视黄醇(retinol，ROH)、甲状腺素运载蛋白(transthretin，TTR)以1∶1∶1的比例形成三元复合物。分泌入血的RBP4量受到视黄醇的严格调控。RBP受体在不同组织细胞的分布变化很大，其与RBP结合力也不一致。在肝、脾、肠分布的受体有特殊的结合力，在视网膜色素上皮细胞、胎盘、肾脏、骨髓其受体有高的结合力。不同组织RBP受体分布与VitA在不同组织的功能、代谢相一致。RBP与ROH结合，将ROH从肝储备区转运至肝外的靶组织。RBP与TTR结合增加ROH-RBP的稳定性，并防止小分子的RBP从肾脏滤过。RBP-VitA依赖细胞的表面受体协助VitA的摄入，当RBP-VitA结合到膜受体上后，RBP的构象改变与TTR及膜受体亲和力下降，促使视黄醇从RBP结合位点释放。

血浆中的视黄醇结合蛋白|4|(Retinol-binding protein4；RBP4)与甲状腺素结合前白蛋白(Thyroxine-binding prealbumin；TBPA)结合形成复合物，并担负维生素A运载系统功能。RBP4最终由尿排出。同TBPA结合的RBP4其半寿期为12h，而游离的RBP4半衰期仅3.5h。该复合物能稳定特异地与ROH结合并进行细胞运转。而RBP4仅仅是血浆中ROH的携带者。多余的RBP4由肾小球滤过，再被近曲小管吸收(代谢降解)。肾小管疾病导致肾小管蛋白重吸收功能下降时，尿液中RBP4含量就会上升，在病情进行的初期约1-3mg/24h，严重时高于3mg/24h以上。(以正常人每天排尿量1.5升计算，约为0.67-2ug/ml，为正常人的10倍以上)，故尿液中RBP4增高具有早期诊断意义，是一种评价肾脏疾病特别是肾小管损伤疾病的良好指标。此外，肝胆系统疾病，如病毒性肝炎早期等、甲状旁腺功能亢进、营养不良均可引起血中RBP4降低，而慢性肾脏疾病时则升高。其检测方法在临床运用中显得尤为重要。目前检测血尿中的RBP4方法较多，常用的有免疫浊度、免疫电泳、酶联免疫和放射免疫分析等，但是酶联免疫具有高通量、可量化、精确度高、灵敏度高等优点。

Lucertini(Lucertini S，Valcavi P，Mutti A.ELISA of RBP in Serum and Urine[J].ClinChem，1984，30：149.)等建立了酶联免疫法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)检测RBP4。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。