[发明专利]含色素上皮衍生因子的复合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种含色素上皮衍生因子(Pigment Epithelium-Derived Factor，PEDF)的复合物，尤其涉及一种能延长PEDF体内半衰期的复合物及其制备方法和应用。

背景技术

新生血管生成是指在原有的血管上生成新的毛细血管。肿瘤的生长和迁移依赖于新生血管的生成，因此抑制新生血管的发生成为一种抗肿瘤治疗的新的手段。(Folkman J.N Engl J Med 1971；285：1182-1186)。

色素上皮衍生因子(PEDF)是人和动物眼中天然存在的一种糖蛋白，分子量为46KD，具有2个结构域：N端的神经营养区域和C端的丝氨酸蛋白酶抑制超基因家族反应环。DNA序列分析显示PEDF属于丝氨酸蛋白酶抑制剂基因超家族，但它不具有抑制蛋白酶的活性。PEDF最初是Tombran-Tink等于1989年从胎儿视网膜色素上皮细胞培养液中分离出来的，由此得名。它可以诱导体外培养的视网膜母细胞瘤细胞系Y79Rb神经元分化。在人胚胎发育到17周的RPE细胞就已经具有这种活性，PEDF被认为是影响早期神经元发育的一个候补因子。1999年Dawson等首次发现PEDF具有很强的抑制血管的作用，可能是维持角膜、玻璃体等眼内组织无血管形成的主要原因，在玻璃体内是主要的血管增生抑制剂(Dawson DW，Volpert OV，Science 1999；285(5425)245-248)。

PEDF具有抑制病理性血管新生和神经营养双重生物学功能，既可以有效地抑制血管新生，又能有效地保护神经元，为眼部新生血管性疾病的治疗提供了新的思路。PEDF将成为控制糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等疾病很有潜力的药物。PEDF可特异性地作用在肿瘤新生血管丰富的区域，而对正常存在的血管没有作用，PEDF这种对新生血管内皮细胞增殖和迁移的特异性抑制，使其成为一种潜在的新生血管抑制剂类抗肿瘤药物。

但是，PEDF蛋白质药物在给药后其体内半衰期短，除了体内蛋白降解作用外，会通过肾小球过滤途径从体内被排除，在有些情况下，因结合特异性抗体而被清除或失活。为维持体内有效的治疗浓度，就需要频繁地注射给药，这种治疗方式虽然可以达到治疗目的，但给病人带来不便与痛苦，且增加了用药成本。

发明内容

本发明要解决PEDF在体内半衰期短的技术问题，提供一种含色素上皮衍生因子的复合物。此外，还需要提供含色素上皮衍生因子的复合物的制备方法和应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

在本发明的一个方面，提供了一种含色素上皮衍生因子的复合物，所述色素上皮衍生因子与聚烯醇类化合物或免疫球蛋白Fc片断偶联。

所述聚烯醇类化合物选自聚乙二醇(Polyethylene Glycol，PEG)、聚乙稀醇、聚丙烯醇、聚丁烯醇或它们的衍生物，优选的，所述聚烯醇类化合物为聚乙二醇，更优选的，该聚乙二醇选自单甲氧基聚乙二醇丙醛或单甲氧基聚乙二醇丁醛。聚乙二醇是线形或分叉，平均分子量为1,000～100,000道尔顿之间，优选10,000～40,000道尔顿之间，更优选分子量为20,000Da和40,000Da的聚乙二醇。

所述复合物中，一个色素上皮衍生因子与一个或多个聚乙二醇分子偶联，该偶联的位点为色素上皮衍生因子的N端α氨基、赖氨酸残基侧链的ε氨基、半胱氨酸残基侧链的巯基、天冬氨酸残基侧链的羧基、谷氨酸残基侧链的羧基中的一个或其多个组合。

优选的，所述复合物中，一个色素上皮衍生因子与一个聚乙二醇分子偶联，该偶联的位点为色素上皮衍生因子的N端α氨基。色素上皮衍生因子N末端单一位点的修饰，使修饰后的色素上皮衍生因子分子结构均一，更有利于药物开发的应用。

所述复合物中，一个色素上皮衍生因子和一个或多个免疫球蛋白Fc片断偶联，该偶联可以是融合表达得到，也可以是通过体外蛋白偶联得到。优选的，该免疫球蛋白Fc片断为人免疫球蛋白IgG中的Fc片断。

在本发明的另一方面，提供了一种包含上述复合物的缓释制剂，该缓释制剂的缓释材料选自微胶囊、水凝胶、微球、微型渗透泵或脂质体。该缓释制剂在保留色素上皮衍生因子生物学活性的同时，能够依靠缓释进一步延长色素上皮衍生因子的体内半衰期。优选的方案为用聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球对PEDF进行包埋，达到体内缓释PEDF的目的。