[发明专利]一种检测微量白蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测微量白蛋白的方法，具体涉及检测含量为纳克级的白蛋白的方法。

背景技术

白蛋白放射免疫分析法是用于测定人尿或体液中白蛋白含量的一种放射免疫技术，其原理是：待测样品、标准品中的白蛋白和¹²⁵I-白蛋白与有限量的抗体竞争结合，¹²⁵I-白蛋白一部分与抗体结合为复合物，另一部分游离；离心使复合物部分与游离部分分离，取沉淀物并测定其放射性计数；待测样品和标准品中的白蛋白含量与复合物的放射性强度呈负相关，用一系列不同浓度的白蛋白做标准，可获得标准曲线，从标准曲线上可查出样品中白蛋白含量。目前市场上出售的白蛋白放射免疫分析药盒主要用于测定人尿中白蛋白含量，该药盒测定白蛋白含量的使用方法的一个例子如下：

(1)用蒸馏水将白蛋白标准品稀释为1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml和50μg/ml，各取100μl，记为标准管B₁、B₂、B₃、B₄、B₅和B₆；

(2)设非特异管和零标管，记为NSB和B₀，分别加入温育液300μl和100μl；

(3)取待检测样品各100μl，记为样品管S₁～S_N(N＝1)；

(4)在B₀、B₁～B₆和S₁～S_N管中各加白蛋白抗体200μl；

(5)取一空白管，记为T管；

(6)在T、NSB、B₀、B₁～B₆和S₁～S_N管中各加¹²⁵I-白蛋白100μl，充分摇匀，37℃温育0.5小时；

(7)在NSB、B₀、B₁～B₆和S₁～S_N管中各加分离试剂500μl，充分摇匀后室温静置15分钟，3500转/分离心20分钟；

(8)弃去上清，在r-计数仪上测定各管计数60秒，最后按公式B/B0％＝{[A-NSB管计数]/[零标准管计数-NSB管计数]}×100％进行计算：以标准管的计数结果代入公式中的A计算，得出标准管的B/B₀％值；以样品管的计数结果代入公式中的A计算，得出样品管的B/B₀％值；

(9)以标准管的B/B₀％值为纵坐标，以标准管的白蛋白浓度为横坐标，在半对数纸上绘制标准曲线，样品白蛋白的浓度可根据样品管的B/B₀％值从标准曲线上查得。

上述方法的检测范围为1μg/ml～50μg/ml，若样品的白蛋白含量超出50μg/ml，可将样品稀释后再重复步骤(1)～(9)，然后将从标准曲线中查得的结果乘以稀释倍数即可。该方法具有稳定性好、准确性及特异性高的优点，但是其灵敏度较差，仅能检测到微克级别的白蛋白，对于含量更低的白蛋白，例如体外培养肝细胞合成的纳克级别的微量人白蛋白，则无法检测出。而且发明人发现，即使将标准品溶液的浓度调低至纳克级别以制作标准曲线，也无法实现纳克级别的白蛋白的准确检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提高白蛋白放射免疫分析法的灵敏度，使其能够检测出含量在纳克级别的白蛋白。

为解决该问题，本发明提供一种检测微量白蛋白的方法，该方法包括以下步骤：

(a)将白蛋白标准品稀释至在纳克级别内适当分布的浓度梯度，加入过量的白蛋白抗体，并进行第一次温育以使它们充分反应；

(b)向温育后的液体中加入相对于剩余白蛋白抗体是过量的放射性同位素标记的白蛋白，并进行第二次温育以使得一部分放射性同位素标记的白蛋白与白蛋白抗体结合为复合物，而另一部分放射性同位素标记的白蛋白为游离状态；

(c)分离所述复合物和游离状态的放射性同位素标记的白蛋白，并测定复合物的放射性计数；

(d)根据放射性计数及相应的标准品中白蛋白的浓度确定两者之间的关系式；

(e)以待测样品代替白蛋白标准品重复步骤(a)-(c)，根据对待测样品所测得的放射性计数和所述关系式确定待测样品中白蛋白的浓度。