[发明专利]海滨锦葵多糖制备工艺及用途

说明书

一.技术领域

本发明属于生化分离技术领域，具体涉及从海滨锦葵中分离制备锦葵多糖的工艺 及用途。

二.背景技术

海滨锦葵(kostelezkya virginica)是锦葵科锦葵属多年生宿根盐生植物，天然分 布于美国东部沿海盐沼海岸带。1992年由南京大学引种至中国。有文献报道，海滨锦 葵的花、叶、根部可食用。尤其是根部可生食、可烹炸、可作茶饮，焙干碾碎可用作 糖果和口香糖原料，以增加胶粘度。根部浸出液可浓缩至蛋清状替代蛋清使用。多糖 在生物界分布很广，从其他动植物中分离制备多糖的研究方法有不少论文和专利。但 从海滨锦葵中提取锦葵多糖以及对锦葵多糖的研究论文很少见到，专利至今未有。

根据我们的研究我们认为锦葵多糖是一种杂多糖，属多糖类。在锦葵根部含量丰 富。从生物学实验证明，锦葵多糖具有增强免疫力的生物学功能。可作为人体非特异 性免疫增强剂，促进体液免疫及细胞免疫，加强抗体或补体生成。该多糖可制成片剂、 口服液、胶囊等作为保健食品给免疫低下者使用，促进他们的健康。也可进一步制成 药品，供免疫低下或肿瘤病人辅助治疗使用。

三.发明内容

本发明需要解决的问题是从海滨锦葵的根中提取出锦葵多糖，并利用锦葵多糖的 生物学功能将其制成片剂、胶囊、口服液等保健食品，供免疫力低下者使用。还可制 成药品供病患者使用。

本发明技术方案

1.海滨锦葵多糖提取工艺：採集海滨锦葵新鲜根，洗净、晒干或烘干，粉碎。取 干粉，按比例1∶15加入蒸馏水，用超声仪加温超声提取。超声条件：功率200瓦， 温度60℃，时间1小时。超声后用纱布过滤。同样条件再重复一次；两次滤液合并。 将滤液蒸发部分后，用乙醇沉淀，将沉淀干燥得粗多糖。将锦葵粗多糖加入适量水溶 解后，加入等体积20％三氯乙酸，沉淀去除蛋白，离心得上清液，减压蒸馏后的浓缩 液对水透析，透析后的溶液加乙醇沉淀，干燥，得去蛋白锦葵多糖(锦葵多糖：简称 JKDT，以下同)溶液，简称为：JKDT-1。

从上步骤得到的JKDT-1用DEAE-纤维素柱层析，梯度洗脱，分别检测，得到洗 脱液，合并有效组分，浓缩，乙醇沉淀，干燥，得组分JKDT-2A、JKDT-2B。得到 的JKDT-2A组分再用sephcryl-200柱层析，纯化分离，得到三个组分，分别是 JKDT-3A、JKDT-3B、JKDT-3C。根据实验结果，JKDT-2B用sephacryl-200层析后仍 为一个峰，不需要再层析。因此锦葵多糖最后组分为四个，分别是：JKDT-2B、JKDT-3A、 JKDT-3B、JKDT-3C。

2.锦葵多糖的生物学功能实验

锦葵多糖免疫活性试验

表1多糖对T细胞增殖的影响(培养24h)

P*＜0.05

表2多糖对B细胞增殖的影响(培养24h)

P*＜0.05

3.锦葵多糖的测定-酚-硫酸法。

本方法是用苯酚-硫酸试剂与锦葵多糖的己糖醛酸起反应，在490nm处产生特征 性光吸收，以光吸收值大小参比标准曲线来确定锦葵多糖的含量。苯酚试剂：取苯酚 200克，加铝片0.2克和NaHCO₃ 0.1克，蒸馏，收集180-182℃馏分称取15克，加 蒸馏水溶解，定容于250ml容量瓶。取干燥的葡萄糖标准品，准确配制浓度为 250μg/ml。分别取0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，放入试管， 再分别补加蒸馏水至1.0ml，加入苯酚试剂1.0ml，再加入浓硫酸5.0ml，冷却后于 490nm处测定光吸收值，以浓度对光吸收值作标准曲线。锦葵多糖同法配制 25-200μg/ml范围内浓度，取1.0ml后再加入1.0ml苯酚试剂，5.0ml浓硫酸，冷却 后测490nm处光吸收值，对照标准曲线计算锦葵多糖的含量。

本发明有益效果是使用了超声方法，并且采用中温度技术(60℃)，从海滨锦葵 中第一次提取了锦葵多糖，并利用现有技术进行了纯化。从我们对模型动物的实验发 现，锦葵多糖具有增强实验动物免疫力的功能。可制备成提高免疫功能的保健食品。 通过进一步的实验和研究，锦葵多糖也可制备成治疗肿瘤的药物。

四.具体实施方式