[发明专利]一种快速检测西布曲明的胶体金层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种西布曲明胶体金层析检测试纸条，其特征在于由衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫组成，金标结合垫为吸附双去甲基西布曲明金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上有用双去甲基西布曲明偶联的载体蛋白溶液印制的直线式隐形检测线T线，用羊抗兔IgG溶液印制的直线式隐形对照线C线，两条线平行排列；

所述的偶联双去甲基西布曲明的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或为鸡卵清白蛋白OVA。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述的衬板为不吸水的韧性材料；所述的韧性材料为硬质塑胶条，或不吸水硬纸条；

所述的样品垫为玻璃纤维棉，或为尼龙膜，或为聚偏二氟乙烯膜，或为聚酯膜；

所述的包被膜为硝酸纤维素膜，或为纯纤维素膜，或为羧化纤维素膜；

所述的吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。

3.权利要求1所述试纸条的制备方法，其特征在于首先制备偶联双去甲基西布曲明载体蛋白，用于制备相应的检测线T线和抗体；制备双去甲基西布曲明金标抗体，用于制备吸附双去甲基西布曲明金标抗体的玻璃纤维棉；制备羊抗兔IgG抗体，用于制备对照线C线；

(1)、将双去甲基西布曲明M₂与载体蛋白BSA进行偶联制备人工结合抗原M₂-BSA；

(2)、将人工结合抗原M₂-BSA按常规方法免疫制得抗双去甲基西布曲明多抗；

(3)、用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm的胶体金溶液；

(4)、用0.1mol/L K₂CO₃或0.1mol/L HCl调节胶体金溶液为pH 9.0，将10mL胶体金溶液加入50mL烧杯中，用电磁搅拌器250rpm搅拌，逐滴加入150μL多抗溶液，平衡过夜，逐滴加入5％BSA，使BSA的终浓度为1％，持续搅拌5min，再将金标抗体溶液常温3000rpm离心15min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀，余下的溶液体积以下称原体积，取该余下的红色上清溶液于4℃以11000rpm离心40min，溶液分为二层：透明上清及管底可流动的暗红色沉淀；轻吸并弃去上清液，将可流动的暗红色沉淀用重悬液混悬，恢复原体积后再离心；重复2～4次，以彻底除去未结合的蛋白质，最后用重悬液将沉淀混悬为原体积的1/10，4℃保存备用，获得双去甲基西布曲明胶体金标记抗体；

所述重悬液为含5％蔗糖的0.002mol/L pH 9.0的硼酸钠缓冲液；

(5)、将1∶100～500稀释的双去甲基西布曲明胶体金标记抗体吸附于玻璃 纤维棉中，37℃干燥，制备双去甲基西布曲明金标结合垫；

(6)、在包被膜上用双去甲基西布曲明偶联的载体蛋白溶液印制直线式隐形检测线T线，用羊抗兔IgG溶液印制直线式隐形对照线C线，两条线平行排列；

(7)、试纸条的组装：将样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫由一端依次粘附在衬板上，即得到用于免疫检测的西布曲明胶体金层析检测试纸条。