[发明专利]肿瘤特异性启动子调控的串联miRNA或shRNA表达载体无效
| 申请号： | 200910022879.9 | 申请日： | 2009-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN101597622A | 公开（公告）日： | 2009-12-09 |
| 发明（设计）人： | 黄辰;刘利英;许德辉;宋土生 | 申请（专利权）人： | 西安交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 | 代理人： | 陈翠兰 |
| 地址： | 710049*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肿瘤 特异性 启动子 调控 串联 mirna shrna 表达 载体 | ||
1、肿瘤特异性启动子调控的串联miRNA或shRNA表达载体，其特征在于，以pMD19-T载体为框架载体，分别连接上五个串联的低氧反应元件HRE5，survivin promoter，及包含GFP的miRNA表达框架，载体大小为4592bp，载体序列为：
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc 240
attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300
tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 360
tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt agaactcggt acgcgcggat 420
cttccagaga ttactagtcc acagtgcata cgtgggctcc aacaggtcct cttggtcgac 480
cccacagtgc atacgtgggc tccaacaggt cctcttgcgg ccgcccacag tgcatacgtg 540
ggctccaaca ggtcctcttc catggccaca gtgcatacgt gggctccaac aggtcctctt 600
cggatccgcc acagtgcata cgtgggctcc aacaggtcct cttccggaat tgcatgcgcg 660
ttctttgaaa gcagtcgagg gggcgctagg tgtgggcagg gacgagctgg cgcggcgtcg 720
ctgggtgcac cgcgaccacg ggcagagcca cgcggcggga ggactacaac tcccggcaca 780
ccccgcgccg ccccgcctct actcccagaa ggccgcgggg ggtggaccgc ctaagagggc 840
gtgcgctccc gacatgcccc gcggcgcgcc attaaccgcc agatttgaat cgcgggaccc 900
gttggcagag gtggcggcgg cggctgatca tctggctaac tagagaaccc actgcttact 960
ggcttatcga aattaatacg actcactata gggagtccca agctggctag ttaagctatc 1020
aacaagtttg tacaaaaaag caggctttaa aaccatggtg agcaagggcg aggagctgtt 1080
caccggggtg gtgcccatcc tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag 1140
cgtgtccggc gagggcgagg gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg 1200
caccaccggc aagctgcccg tgccctggcc caccctcgtg accaccttca cctacggcgt 1260
gcagtgcttc gcccgctacc ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat 1320
gcccgaaggc tacgtccagg agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac 1380
ccgcgccgag gtgaagttcg agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat 1440
cgacttcaag gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca 1500
caaggtctat atcaccgccg acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagacccg 1560
ccacaacatc gaggacggca gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat 1620
cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag 1680
caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg 1740
gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa gtaagctaag cacttcgtgg ccgtcgatcg 1800
tttaaaggga ggtagtgagt cgaccagtgg atcctggagg cttgctgaag gctgtatgct 1860
ggaattctgc agctagcggt accaagcttc aggacacaag gcctgttact agcactcaca 1920
tggaacaaat ggcccagatc tggccgcact cgagatatct agacccagct ttcttgtaca 1980
aagtggttga tctagagggc ccgcggttcg ctgatggggg aggctaactg aaacacggaa 2040
ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca 2100
cgggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg 2160
ataccccacc gtgaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc 2220
accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg 2280
ccatagcatc ccctatagtg agtcgtatta catggtcata gctgttgagc tcatcgtcga 2340
acggcaggcg tgcaaacttg gcgtaatcat ggtcatagcg tttcctgtgt gaaattgtta 2400
tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc 2460
ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg 2520
aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg 2580
tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg 2640
gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa 2700
cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc 2760
gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc 2820
aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag 2880
ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct 2940
cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta 3000
ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc 3060
cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc 3120
agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt 3180
gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct 3240
gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc 3300
tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca 3360
agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta 3420
agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa 3480
atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg 3540
cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg 3600
actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc 3660
aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc 3720
cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa 3780
ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc 3840
cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg 3900
ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc 3960
cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat 4020
ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg 4080
tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc 4140
ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg 4200
aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat 4260
gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg 4320
gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg 4380
ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct 4440
catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac 4500
atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta 4560
taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc 4592
2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，载体上各元件位置为：
HRE5：439-651 SpeI：433-438
Survivin promtor：658-924 SphI：652-657
GFP：1055-1774 FbaI：925-930
MCS：1862-1889 SacI：2327-2332
PolA；2016-2332 EcoRI：1862-1867
Ori：2774-3362 PstI：1867-1872
Amp：3533-4393 NheI：1872-1877
HindIII：1884-1889。
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