[发明专利]一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，属于生物技术领域。

背景技术

PCR产物中除了含有目的DNA片段之外，还含有剩余的引物、Taq DNA酶以及dNTP，这些成分的存在将会影响到后续的一些实验。例如：双脱氧PCR测序反应只需要单侧引物，因此要去除过量剩余的双侧引物；单核甘酸延伸SNP基因分型技术(Applied BiosystemSNaPShot)要去除所有残存的dNTP，反应中只允许荧光标记的单个ddNTP掺入。因此，对PCR产物进行纯化非常必要。

目前，扩增后的PCR产物纯化主要有两类：一种是直接从PCR扩增反应混合物中进行纯化，如超滤、沉淀(PEG沉淀)，硅结合等；另一种是先将PCR产物进行凝胶电泳，然后通过柱纯化、磁珠纯化或尼龙膜等方法纯化。然而，这些纯化方法各有利弊，一般来讲，其弊端如下：

1.DNA回收率不高，大致在50％～90％；

2.纯化试剂价格昂贵，一般的试剂盒纯化一个样本约需要人民币3-5元；

3.回收DNA片段长度范围窄，尤其对短的DNA片段不易回收，且得率低；

4.操作步骤比较繁琐，费时费力；

5.回收使用的试剂会给后续实验带来干扰。

因此，探索一种能将各种长度的PCR产物中的目的片段，大批量地、廉价地、高纯度地，纯化出来的方法，一直是分子生物学研究工作者所不断追求的。

发明内容

本发明的目的是克服上述弊端，而提供一种成本较低、高效、快速、回收片段范围大的PCR产物的纯化方法。

本发明解决问题所采取的技术方案是一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，其特征是：将经琼脂糖凝胶电泳DNA分离技术分离得到的PCR产物中的目的DNA片段切胶后放入离心管，向其直接加去离子水并水浴锅加热使凝胶溶解，然后迅速加入无水乙醇，再高速离心沉淀分离得到纯化产物。

所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，其中加热为水浴锅加热至煮沸，煮沸时间约6～10分钟。

所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，其中无水乙醇是在凝胶刚溶解完时立即加入的。

所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，其中先加入的去离子水与后加入的无水乙醇的体积比为4：10。

所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，其中离心沉淀用的离心速度为14000～16000转/分钟。

本发明提供的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法，成本较低，只需几分人民币，而一般商用试剂盒成本是其数百倍，另外该方法具有高效、快速、回收片段范围大、方便等优点。全套操作只需15分钟便可完成，片段范围为大于等于30bp，回收纯化的DNA片段纯度高，完整性好，纯化的产物可用于连接、标记、测序、杂交、酶切、显微注射、体外转录等后继实验。

本发明提供的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法纯化效果如表1、表2和表3。

表1：PCR产物纯化前后DNA浓度测定