[发明专利]一种农杆菌介导的甘薯不定芽转化方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的甘薯不定芽转化方法，步骤包括无菌苗快繁，以甘薯茎段为受体的遗传转化，不定芽再生及小苗生根，抗生素筛选和小苗移栽，其特征在于：

所述以甘薯茎段为受体的遗传转化方法是：将培养20-30天的甘薯无菌小苗剪去叶片及根，将茎切成0.5-1厘米的小段，每段含1-2个节，将茎段沿侧芽所在的轴线纵向切成两半，并切去可见的侧芽；再将经过上述处理的甘薯茎段切面向下置于固体培养基上，22℃-25℃下暗培养3天；然后将上述暗培养的甘薯茎段在OD600为0.6-1.0的农杆菌悬液中侵染10-15分钟，而后用无菌滤纸吸去菌液，切面朝下置于继代培养基上，23℃-25℃下暗培养5天；

所述不定芽再生及小苗生根的方法是：将上述暗培养5天的甘薯茎段用无菌水清洗3-4次，再用无菌滤纸吸干，转接至不定芽诱导培养基上，在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下，连续培养20±2天，分化出不定芽；当甘薯茎段上的不定芽长至1厘米时，将小芽单独剪下，转移到生根培养基上，在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下，培养14±1天，进行生根；

所述抗生素筛选的方法是：将已生出1-2cm根的甘薯小苗不伤及根部取出，转接到含相应抗生素的筛选培养基上，在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下，培养14±1天；其中所述筛选培养基配方为：MS+0.1-1.0mg/L NAA(萘乙酸)+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，并添加200mg/L头孢噻肟钠和25mg/L卡那霉素，pH5.8；

其中：

上述固体培养基配方为：MS+0.1-1.0mg/L NAA(萘乙酸)+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8；

上述继代培养基配方为：MS+0.1-1.0mg/L NAA(萘乙酸)+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH5.8；

上述不定芽诱导培养基配方为：MS+0.1-1.0mg/L KT(激动素)+0.01-0.1mg/L NAA(萘乙酸)+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，并添加200mg/L头孢噻肟钠，pH5.8；

上述生根培养基配方为：MS+0.1-1.0mg/L NAA(萘乙酸)+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，并添加200mg/L头孢噻肟钠，pH5.8。