[发明专利]一种由普鲁兰糖制备高纯度麦芽三糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种麦芽三糖的制备方法，尤其是涉及一种由普鲁兰糖(pullulan)制备 高纯度麦芽三糖的方法。

背景技术

麦芽三糖是一种非常有价值的低聚糖，由三个葡萄糖单元经α-1，4-糖苷键连接而成， 其分子量为504.44。α-淀粉酶的测定在临床上应用已有多年，自70年代后期国外开始研制 以人工合成底物测定淀粉酶的方法，近年来此类研究发展较快，并取得很大进展，在临床 上已广泛应用，其中以对硝基苯酚麦芽寡糖苷(PNP-Gn)和2-氯4-硝基苯酚麦芽糖苷(CNP -Gn)为主要发展趋势，尤其以麦芽三糖连接的底物，因其不用辅助酶、价格低廉、精确 度高，而得到广泛的认可和应用。对诊断急性胰腺疾病来说，测定人血清中的胰淀粉酶(一 种α-淀粉酶)活性是最实用和最灵敏的方法。最新的研究结果表明，由2-氯4-硝基苯酚 与麦芽三糖组成的底物最适于急性胰腺疾病的诊断。

但目前麦芽三糖的生产方法有：(1)以小麦淀粉为原料通过酶解的方式获得含麦芽三 糖70％左右的优质糖浆，其纯度较低，分离提取困难，不能作为诊断试剂使用；(2)发酵 法，通过发酵方式获得试剂级高纯度的麦芽三糖，同样存在纯度较低提取困难的问题。

发明内容

本发明提供一种由普鲁兰多糖为原料，采用普鲁兰酶酶解，然后经分离纯化制得医药 级麦芽三糖的生产方法。本发明所述工艺路线生产麦芽三糖，产品纯度高，得率高，成本 低，生产过程可实现连续化和自动化，由普鲁兰糖可大量制备医药级的麦芽三糖，简化了 麦芽三糖制备工艺。

普鲁兰多糖是一种由出芽短梗霉产生的胞外水溶性粘质多糖，该多糖是由α-1，4-糖 苷键连接的麦芽三糖重复单位经α-1，6-糖苷键聚合而成的直链状高分子多糖。

本发明的技术方案是：(1)采用普鲁兰酶，对普鲁兰多糖进行酶解；(2)采用超滤 膜去除反应液中的大分子蛋白质类物质；(3)采用纳滤膜去除反应液中的小分子盐类物 质及浓缩反应液，(4)采用色谱柱分离并获得高纯度的麦芽三糖溶液，真空干燥得成品 麦芽三糖。

本发明一种由普鲁兰多糖制备高纯度麦芽三糖的方法，包括以下步骤：

(1)将普鲁兰多糖溶解于pH5.7的0.2M的磷酸缓冲液，配置成8％(质量百分浓度) 的普鲁兰多糖溶液，按照每1kg普鲁兰多糖溶液加入2.5g普鲁兰酶的比例加入普鲁兰酶， 保持温度在45～48℃，反应时间为8小时；

(2)反应结束后，采用超滤膜分离器除去反应液中的大分子蛋白质类物质，所述超 滤过程是将反应液从反应罐泵入第一储罐中，由第一储罐泵入膜分离器中，膜的截留分子 量为3000-10000D(道尔顿)，截留液返回第一储罐中，透出液流入第二储罐，此过程连续 向第一储罐中补充去离子水，直至截留液中麦芽三糖残留量达标。

(3)采用纳滤膜法去除步骤(2)中透出液中的小分子盐类物质，所述膜滤过程是将 步骤(2)中第二储罐内的透出液泵入纳滤膜分离器中，膜的截留分子量为180D，截留液 返回第二储罐中，此过程连续向第二储罐中补充去离子水，直至溶液的电导率小于 200μs/cm，停止补加去离子水，继续进行膜滤操作，直至浓缩液体积达到步骤(1)中反应 液体积的二十分之一；

(4)将浓缩液通过色谱柱，收集获得高纯度麦芽三糖组分，直接真空冷冻干燥，粉 碎机粉碎，得到麦芽三糖成品，本发明采用的色谱柱为工业用葡聚糖凝胶G25柱，洗脱液 为去离子水。

本发明采用的超滤膜分离器可以是商用的板式超滤膜或者卷式超滤膜。膜的孔径以能 透过麦芽三糖和通透量为参考，但是必须截留蛋白质分子，通常为3000-10000道尔顿。

本发明采用的纳滤膜分离器可以是商用的板式纳滤膜或者卷式纳滤膜。膜的孔径以能 透过水分子及小分子盐类物质和通透量为参考，但是必须截留麦芽三糖分子，通常为180 道尔顿。

本发明的效果是：采用本发明所述工艺路线生产麦芽三糖，产品纯度高(大于99％)， 得率高(≥85％)，成本低，生产过程可实现连续化和自动化，由普鲁兰多糖可大量制备医 药级的麦芽三糖，简化了麦芽三糖制备工艺，对于急性胰腺疾病快速诊断试剂的生产以及 具有药用前景的糖类化合物的开发都具有重要意义。

附图说明

本发明附图为本发明制备方法的工艺流程图。

具体实施方式