[发明专利]一种醋酸阿托西班及其制剂的含量测定和有关物质测定的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种活性多肽原料药和制剂的方法检测方法，尤其是涉及醋酸阿托西班及其 制剂的含量测定和有关物质测定的方法。

背景技术：

阿托西班(atosiban)，其化学名称为：1-(3-硫醇丙醇酸)-2-(O-乙基-D酪氨酸)-4-L- 苏氨酸-8-L-鸟氨酸-催产素。

其结构式为：

阿托西班是一种催产素类似物，为人工合成的环状多肽，是子宫内及蜕膜、胎膜上受体 的催产素竞争性拮抗剂，在临床上使用其醋酸盐治疗早产。醋酸阿托西班注射液(Atosiban Acetate Injection)由辉凌公司(Ferring AB)研制，2000年3月23日首次在奥地利上市，商 品名为：

醋酸阿托西班和醋酸阿托西班注射液的有关物质和含量的检测方法尚未见报道，其测定 方法的难度在于在其合成过程中可能会产生缺失(不完全)肽、断裂肽、去酰胺多肽、非对映 异构的多肽和低聚物等多种工艺杂质，通过色谱法进行纯化后，无法去除的杂质与主药的色 谱行为比较相似，不易完全分离。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能测定醋酸阿托西班[1-(3-硫醇丙醇酸)-2-(O-乙基-D酪氨酸) -4-苏氨酸-8-鸟氨酸-催产素醋酸盐]及醋酸阿托西班制剂的含量和有关物质的检测方法。

本发明的醋酸阿托西班含量测定方法如下：

采用反相高效液相色谱法检测1-(3-硫醇丙醇酸)-2-(O-乙基-D酪氨酸)-4-苏氨酸-8- 鸟氨酸-催产素醋酸盐及其制剂中醋酸阿托西班的含量，其步骤包括：

1)取样品适量，用流动相A配制成每1ml中含0.75mg的溶液，作为供试品溶液；

2)另称取对照品适量，用流动相A溶解并稀释制成每1ml中含0.75mg的溶液，作为对 照品溶液；

3)量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标 法以峰面积计算，得到样品中醋酸阿托西班的含量。

色谱条件：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g， 加水至1000ml，用磷酸调节pH值至2.3，再加入120μl三乙胺，即得)为流动相A，乙腈为 流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为215nm；流速为1.0ml/min。理论塔板数按阿托西班峰 计算应不低于5000。梯度洗脱程序如下：

其中对照品为醋酸阿托西班纯品，可从试剂商店购买。

本发明的有关物质含量测定方法，步骤如下：

1)取样品适量，加流动相配制成每1ml中约含1.5mg的溶液，作为供试品溶液；

2)量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶 液；

3)取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量 程的20％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱 图至主成分峰保留时间的2倍，计算有关物质含量。

色谱条件：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g， 加水1000ml，用磷酸调节pH值至2.3，再加入120μl三乙胺，即得)为流动相A，乙腈为流 动相B，进行梯度洗脱；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min。理论塔板数按阿托西班峰计 算应不低于5000。梯度洗脱程序如下：

其中所述有关物质是指醋酸阿托西班合成过程中带有的杂质成分，如溶剂，中间体，原 料，氨基酸片段等，杂质成分为限制成分，测定有关物质目的在于限制其含量。

本发明测定方法的特点是：被分析物中各成分间分离彻底，可操作性强，分析方法专属 性强、准确性和灵敏度高、适应性强为保证药品安全、有效、可控提供依据。

附图说明：

图1为0.1％三氟乙酸∶乙腈为流动相的色谱图

图2为0.05mol/L磷酸盐缓冲液∶乙腈为流动相的色谱图

图3为专属性实验色谱图。

图4为检测限色谱图。

图5为样品有关物质测定的色谱图。

图6为样品含量测定的色谱图。

具体实施方式：