[发明专利]一种双特异性寡肽-力达霉素强化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE

说明书

技术领域：

本发明涉及一种新型抗肿瘤靶向药物及其制备方法和应用。

背景技术：

恶性肿瘤是威胁人类健康的多发病和常见病，已经位居人类疾病中三大主要 死亡原因之首。传统的肿瘤化学治疗，由于靶向性不明确、选择性不强、特异性 不高和极易产生耐药等，导致其存在杀伤肿瘤细胞的同时损害正常组织细胞，影 响疗效和生存期等缺陷。靶向性治疗则可克服传统化疗的不足，提高抗肿瘤治疗 的效果。在靶向性治疗中，单克隆抗体发挥了重要的作用，然而单抗存在对实体 肿瘤渗透能力差的缺点。因此，采用小分子寡肽配体取代单抗的作用，已成为靶 向药物的一个发展方向。

表皮生长因子受体EGFR(或称HER1)、HER2、HER3和HER4都是跨膜 受体酪氨酸激酶家族(ErbB)的成员。该家族成员有着相似的结构，均由胞外 配体结合结构域、胞内激酶结构域和跨膜结构域组成。当配体与受体结合后，可 导致受体发生同二聚化或异二聚化，从而激活受体的酪氨酸激酶活性，进而活化 一系列的胞内信号通路，最终促进细胞的生长、增值、分化和迁移。EGF是EGFR 的天然配体，以EGF或抗EGFR的单克隆抗体为导向分子构成的融合蛋白，能 够通过EGFR介导的内吞作用而进入EGFR表达的肿瘤细胞，从而发挥特异性 杀伤作用。EGF由53个氨基酸组成，与受体结合的区段位于其C环。HER2 目前还未发现其天然配体，但在发生二聚化时，它是其他受体优先选择的对象。

ErbB受体家族与人类癌症的关系非常密切，尤其是EGFR和HER2。ErbB 受体发生改变的肿瘤通常更具有侵袭性，而且病人往往也预后不良。例如：在 25-30％的乳腺癌中HER2基因呈高表达，在非小细胞肺癌和头颈部肿瘤中EGFR 大量表达或发生突变等，这就使得EGFR和HER2成为很有前景的肿瘤治疗靶点。 目前临床使用的靶向ErbB受体的药物主要可分为两类：一类是单克隆抗体，用 于结合受体的胞外结构域；另一类是小分子的酪氨酸激酶抑制剂，其机制是竞争 性地结合酪氨酸激酶结构域的ATP结合位点。这些药物单独使用或者与其他化 疗药物联合应用均获得了较好的疗效，但耐药性问题仍然比较突出。

研究显示，EGFR和HER2是协同发挥作用的，共同导致NIH 3T3细胞的癌 变，而单独的任何一个受体都不足以引起细胞的转化。另一些研究也表明，在其 他受体配基存在的情况下，靶向于某一ErbB受体的抗肿瘤药物的效果会被抵消。 此外，一些临床前的体内外研究也显示，对ErbB受体的双重抑制要比单独靶向 一个受体的抗肿瘤效果好。

力达霉素(Lidamycin，LDM)也称C-1027，是从我国湖北省潜江县土壤中 分离得到的一株链霉菌(Streptomyces globisporus，菌种保藏号：CGMCC No.0704) 产生的烯二炔类抗生素，是迄今报道过的对肿瘤细胞杀伤作用最强的大分子肽类 抗肿瘤抗生素。体内动物试验表明，LDM对小鼠结肠癌26有非常显著的疗效， 对人肝癌Bel-7402和盲肠癌Hce-8693等多种人移植瘤均有较好疗效[中国抗生 素杂志1994，19(2)：164-168]。LDM由辅基蛋白(LDP)和烯二炔结构的发色 团(AE)两部分组成，发色团是力达霉素分子的活性部分，辅基蛋白对发色团起稳 定保护作用。LDM的发色团和辅基蛋白系通过非共价键结合，因而可在体外将 其拆分与重建。LDM以其独特的分子结构，成为构建新型导向药物的理想“弹 头”[中国医学科学院报2001，23(6)：563-567]。

小型化和高效化，是解决当前单抗治疗剂所遇难点的重要途径。本发明的目 的，是以靶向EGFR和HER2的两个寡肽Ec、Hr为导向分子，以LDM为“弹 头”，制备双特异性强化融合蛋白。该强化融合蛋白在体外对肿瘤细胞有强烈的 杀伤作用，体内试验对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤疗效显著。本发明所说的 双靶点强化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE，迄今为止尚未见有相关报道。

发明内容：