[发明专利]永生化禽细胞系

权利要求书

1.包含E1A核酸序列的永生化禽细胞，其特征在于所述细胞通过包 含用含有所述E1A核酸序列的非病毒载体转染所述细胞的步骤的方法获 得，并且其中所述细胞不包含E1B核酸序列。

2.权利要求1的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列被插入所述禽 细胞的HPRT基因。

3.权利要求2的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列可操作连接于 所述细胞的内源HPRT启动子。

4.权利要求1-3之一的永生化细胞，其中所述细胞源自属于鸭科的动 物。

5.权利要求4的永生化细胞，其中所述动物属于番鸭种。

6.权利要求4的永生化细胞，其中所述动物属于绿头鸭种。

7.权利要求1-6之一的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列与SEQ ID NO：1具有至少60％核酸序列相同性。

8.权利要求1-6之一的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列与SEQ ID NO：1具有至少70％核酸序列相同性。

9.权利要求1-8之一的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列与SEQ ID NO：1具有至少80％核酸序列相同性。

10.权利要求1-6之一的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列与SEQ ID NO：1具有至少90％核酸序列相同性。

11.权利要求1-6之一的永生化细胞，其中所述E1A核酸序列为SEQ ID NO：1。

12.权利要求1-11之一的永生化细胞，其中其还包含编码重组端粒酶 逆转录酶的核酸序列。

13.权利要求12的永生化细胞，其中所述编码重组端粒酶逆转录酶 的核酸序列与SEQ ID NO：3具有至少70％，更优选至少90％，和更优选至 少95％核酸序列相同性。

14.权利要求12的永生化细胞，其中所述编码重组端粒酶逆转录酶 的核酸序列是SEQ ID NO：3。

15.权利要求1-14之一的永生化细胞，其中其还包含编码目的物质的 核酸序列。

16.权利要求1-14之一的永生化细胞，其中其还包含允许缺陷病毒增 殖的互补盒。

17.权利要求1-16之一的永生化细胞在病毒复制中的用途。

18.权利要求17的用途，其中所述病毒选自下组：牛痘病毒，鼠痘病 毒，猴痘病毒，痘苗病毒，天花病毒和MVA。

19.权利要求1-16之一的永生化细胞在制备目的物质中的用途。

20.权利要求1-16之一的永生化细胞在制备病毒中的用途。

21.权利要求20的用途，其中所述病毒是痘病毒。

22.权利要求21的用途，其中所述病毒是痘苗病毒。

23.权利要求22的用途，其中所述痘苗病毒是MVA。

24.权利要求1-16之一的永生化细胞在制备重组病毒中的用途。

25.使禽细胞永生化的方法，包括用包含E1A核酸序列的非病毒载体 转染所述细胞的步骤，其中所述方法不包括用E1B核酸序列转染所述细胞 的步骤。

26.权利要求25的方法，其中所述载体包含与所述细胞基因组中存 在的序列同源的两个序列。

27.权利要求26的方法，其中所述E1A核酸序列被所述同源序列包 围。

28.权利要求26或27的方法，其中所述载体还包含第一选择标记， 其中所述第一选择标记是阳性选择标记并且其中所述第一选择标记被所述 同源序列包围。