[发明专利]包括至少一个与生物素或生物素衍生物的共价键的肝素、其制备和用途

说明书

本发明涉及含有至少一个与生物素或生物素衍生物的共价键的肝 素，还涉及它们的制备方法、含有它们的药物组合物和它们的治疗用途。

肝素是分子量为大约15000道尔顿(Da)的动物来源的硫酸化粘多糖 混合物。下文中会提到肝素(héparine或héparines)：肝素的多糖链的结 构、平均分子量和多分散性实际上随动物物种和生成肝素的器官而变(例 如：猪粘液肝素、牛肠肝素等)。

肝素尤其通过抗凝血酶III(ATIII)催化参与凝血级联反应(cascade de la coagulation du sang)的两种酶，即Xa因子和IIa因子(或凝血酶)的抑制。 其因此因其抗凝血和抗血栓形成性质而用于治疗。

但是，肝素具有限制其使用条件的缺陷。特别地，其高抗凝血活性 (尤其是其高的抗IIa因子的活性)可造成出血(Seminars in Thrombosis and Hemostasis，第5卷，sup.3，1999)，所述肝素由于这些不合意的出血 副作用是已知的。

在治疗血栓形成的领域中，目标是在避免诱发出血的同时重建或维 持血液流动性。实际上，公知的是，任何意外原因都可能在治疗的患者 中触发出血。也可以需要对处于抗血栓形成治疗中的患者进行外科手 术。此外，在某些外科手术过程中，可高剂量使用抗凝血剂以防止血液 凝结，在手术最后中和它们是合意的。因此需要可中和的抗血栓形成剂 以随时终止抗凝血活性。

在专利申请WO 02/24754和WO 06/030104中已经描述了可中和的 抗血栓形成剂，如生物素化的合成多糖。它们的合成，尤其包括在上文 提到的多糖的被护等价物上而非在这些多糖本身上进行的生物素或生 物素衍生物的接枝，不适用于本发明的化合物。原因在于，希望在最终 产品上进行生物素化，该最终产品是多糖的混合物并因此是异质产品， 如上述专利申请中所述的生物素在其上的接枝不能诱发接枝位置的充 足区域选择性并且不能实现肝素的所有可官能化多糖链的生物素化。

Osmond等人的团队在Analytical Biochemistry，31(2002)199-207中 描述了将猪肝素生物素化的几种技术，其中之一被描述为经由还原性氨 基化然后与生物素偶联在肝素的还原端偶联生物素。但是，所述文献中 描述的操作条件不能完全和可再现地获得生物素化肝素：它们未考虑肝 素的结构多样性和如在市售肝素中存在的多糖链的实际结构。市售肝素 包含大比例的在其还原端含有根据Osmond等人所述的规程用生物素不 能官能化的降解的糖丝氨酸(glycosérine)的多糖链。因此，所述出版物中 描述的用于猪肝素生物素化的操作条件不能完全和可再现地获得具有 预期特征(如足以实现有效中和的生物素化率)的生物素化肝素。

Tseng等人的团队在Biomaterials，27(2006)，2627-2636中描述了通 过与抗生物素蛋白相互作用然后用生物素将肝素官能化的将肝素固定 在薄膜上的技术。通过用碘氧化然后形成内酯然后与生物素的2-(4-氨基 苯基)乙胺衍生物偶联，进行肝素的生物素化。但是，Tseng等人提出的 操作条件没有假定在还原端完全和可再现获得被生物素化的肝素：具体 而言，没有表明该氧化步骤在还原端上可以是选择性的，也没有表明在 这种处理后保持肝素的生物活性。

Kett等人的团队在Biochimica et Biophysica Acta，1620(2003)， 225-234中描述了抗生物素蛋白与各种糖胺聚糖之间的亲合力研究，并 证实抗生物素蛋白对肝素表现出强亲合力。在这些亲合力研究中，肝素 可以用生物素衍生化，但没有指出在肝素的多糖链中哪个是生物素化的 位置。

因此，申请人的目标是提供可用抗生物素蛋白或链霉亲和素中和的 并具有与天然(native)肝素相当的生物性质的新型肝素。

本发明目的是新型的改性肝素，在下文被称作“生物素化肝素”， 其特征在于所述肝素的构成多糖(polysaccharides constitutifs)在它们的还 原端具有与基团(R1)_i-Biot的共价键并符合通式(I)：

其中：

-i等于0或1，

-R1代表式(a)或(b)的链区：

其中j和k，相同或不同，是可以取1至10的任何值的整数，