[发明专利]黄曲霉毒素的固相萃取

说明书

技术领域

本发明涉及适用于结合黄曲霉毒素(B₁、B₂、G₁和G₂)的聚合物。 该聚合物可用于黄曲霉毒素的固相萃取和将黄曲霉毒素固定在固相萃 取(SPE)盒中以对从食品或饲料提取的溶液中的黄曲霉毒素进行定性 或定量分析。

发明背景

各种各样的人类食品和动物饲料，其中包括食用坚果、油籽、谷物、 草料和用它们生产的产品，很容易受到霉菌毒素的污染，这是霉菌的有 毒代谢副产物，它们可能会在收获前和后在粮食和饲料作物中存在。其 中最重要的是黄曲霉毒素，由霉菌黄曲霉和寄生曲霉产生的一组密切相 关的霉菌毒素。并非所有的霉菌隔离群都产生黄曲霉毒素，因此仅仅存 在黄曲霉或寄生曲霉并不意味着黄曲霉毒素将在基体上存在。因此直接 测量黄曲霉毒素水平是食品和饲料的质量控制的一个重要方面。

这种测量通常使用高效液相色谱法(HPLC)进行。然而，在高效 液相色谱设备无法使用或不适于使用的情况下，通过薄层色谱法(TLC) 来测定也是可行的。在TLC分离后，用发射波长366纳米的汞灯作为 光源以激发荧光，可以使用商用扫描仪进行霉菌毒素测量，该荧光用光 电倍增管检测和量化。对于定量检测，还有放射免疫检定技术和以免疫 化学为基础的技术，如酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。

在从食品样品中仪萃取法得到的溶液例如使用HPLC定量测定之 前，可使用固相萃取对该溶液进行“清理”工序，以去除可能会干扰霉 菌毒素的评估的化合物。

可以使用小型色谱柱(称为“微型柱”，mini-column)进行霉菌毒 素的定量检测，其中在微型柱的矿物吸附剂内霉菌毒素被固定为一层。 在紫外线光下观察微型柱，被固定的霉菌毒素会产生荧光。多种微型柱 方法已经被采纳成为AOAC国际(官方分析化学家协会Association of Official Analytical Communities)的正式测试。

WO 2006/123189描述了一种对固定在微型柱的层中的霉菌毒素进 行定量荧光测定的装置，并且还提到了分子印迹聚合物和非分子印迹 (空白)聚合物作为SPE盒中霉菌毒素吸附剂的用途。

WO 2003/101580公开了一种用于将霉菌毒素与固体载体结合的方 法，其中包括利用霉菌毒素作为模板来准备分子印迹聚合物(MIP)。从 所提到的霉菌毒素和功能单体的大批清单中，实际制备的一些MIP仅使 用霉菌毒素脱氧萎镰菌醇(mycotoxins DON)和玉米赤霉烯酮(ZON) 作为模板。对于DON的MIP以二乙氨乙基-甲基丙烯酸甲酯(DEAMA)、 4-乙烯基吡啶(4-VP)或甲基丙烯酸(MAA)与作为交联剂的乙二醇- 甲基丙烯酸酯(EDMA)或二乙烯基苯(DVP)聚合而成。对于ZON 的MIP是用EDMA作为交联剂以三氟甲基丙烯酸(TFM)或4-VP聚 合得到的。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用作对于黄曲霉毒素有选择性的SPE 吸附剂的聚合物。

本发明是基于以下发现：含有酰胺、胺、吡啶、磷酸盐或磺酸盐部 分的聚合物在用作SPE吸附剂时能够固定黄曲霉毒素。

因此从广义上看，本发明提供了含有酰胺、胺、吡啶、磷酸盐或磺 酸基的聚合物作为SPE吸附剂以固定黄曲霉毒素的用途。

如果这种聚合物本身是新颖的，它们也形成本发明的另一个方面。

所述聚合物最好含有由丙烯酰胺基单体而来的部分，例如一种或多 种亚甲双丙烯酰胺(MBBA)、丙烯酰胺或丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸 (AMPSA)，或它们的衍生物。

用于本发明的聚合物可通过常规聚合技术制备，不使用黄曲霉毒素 或结构类似物作为模板(template)。所述聚合物优选被制备为大孔性的 (macroporous)，例如通过在聚合过程中使用致孔剂形成。

本发明的另一个方面是一种SPE吸附剂单元，包括装有或涂有上 述聚合物的吸附剂层的柱、试管、棒、针、膜或平整表面。

本发明的另一个方面是一种黄曲霉毒素的荧光分析方法，包括以下 步骤：将黄曲霉毒素吸附在装入或装在试管、盒、棒或平整表面中的所 述聚合物上，使所固定的黄曲霉毒素曝露在紫外线光中，以及检测由所 述固定的黄曲霉毒素发出的荧光。