[发明专利]褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法无效
| 申请号： | 200810249566.2 | 申请日： | 2008-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN101451122A | 公开（公告）日： | 2009-06-10 |
| 发明（设计）人： | 樊廷俊;魏云波;姜国建 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266003山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 石斑鱼 细胞系 构建 方法 | ||
1.一种褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法，首先将鲜活褐点石斑鱼暂养于浓度均为1000单位／毫升的青霉素和链霉素的高双抗海水中消毒处理，24 小时后以75％酒精再次消毒，置于超净工作台中解剖取下鳔组织，用磷酸盐缓冲液漂洗后剪成大致1mm3 的组织块；离心收集的鳔组织块则用含有5％胎牛血清和0.05 ‰ -0.15 ‰的羧甲基壳寡糖的pH 值为7.0-7.4的DMEM / F12 培养液充分悬浮，均匀接种于使用0.01％明胶进行预处理的25毫升培养瓶中，22-24℃ 下正置干贴16-20 小时后，每瓶加入5毫升褐点石斑鱼鳔细胞专用增殖培养液，置22-24℃生化培养箱中培养，每隔3-5天吸出2.5 毫升上述25 毫升培养瓶中的培养液，再添加2.5 毫升上述褐点石斑鱼鳔细胞专用增殖培养液；待褐点石斑鱼鳔细胞长成单层后，使用浓度为0.1％-0.3％胰蛋白酶溶液消化，按1 瓶传2 瓶的方式进行传代培养；所述的褐点石斑鱼鳔细胞专用增殖培养液配方为含有20％胎牛血清和0.05‰-0.15‰比例的羧甲基壳寡糖、pH 值为7.0-7.4 的DMEM / F12 培养液。
2.如权利要求1 所述的细胞系的构建方法，其特征是在上述褐点石斑鱼鳔细胞专用增殖培养液中又添加占该培养液0. 01‰-0.02‰比例的人碱性成纤维细胞生长因子、0.02‰-0.04‰比例的I 型人胰岛素样生长因子和0.05‰-0.15‰ 的N-乙酰葡萄糖盐酸盐。
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