[发明专利]蛋白凝胶测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种凝胶测定方法，尤其涉及一种大豆蛋白的凝胶测定方法。

背景技术

目前常见的几种凝胶检测方法

方法一：1.准确称取30g蛋白粉，量取170ml 2.5％盐水(蛋白质浓度为15％)。将称量好的蛋白粉和5℃左右的冷却水缓慢倒入搅拌机充分搅拌1分钟，20秒停一次，每停一次用塑料铲将搅拌杯壁及其底部的蛋白粉刮起以便于搅拌均匀，开始时先点动搅拌，再快速搅拌。将均质处理好的蛋白质全部转移到大样品袋中然后进行抽真空。将真空后蛋白充填到模具中，充填过程要慢、稳，避免有气泡，每个样品做三个平行样。

2.80℃水浴加热30min，然后流水冷却1h。然后采用物性测定仪对其凝胶值进行测定。

缺点：凝胶的检测数据的稳定性低。

方法二：取适量大豆分离蛋白分别溶解于25mi的蒸馏水、KCl溶液和CaCl。溶液中。电动搅拌，使成为均匀的蛋白质悬浮液。将其置于95℃恒温水浴中加热40min后于冰水浴中迅速冷却，直至成凝胶，在4℃冰箱中陈化24h，制得浅黄色半透明大豆蛋白凝胶。制成的凝胶一部分进行热分析；另一部分常温真空干燥后测溶胀率。

缺点：蛋白凝胶检测的针对性比较低，实验检测结果的稳定性不好，实验方案繁琐，适用性不高。

方法三：1.凝胶的制备：将分离蛋白溶于去离子水中，浓度为12％(W/W)，搅拌均匀，将此蛋白溶液装于10mL的烧杯中，盖以保鲜膜，置于95℃的水浴中加热保温30min，然后用冰浴冷却至室温，在4℃的冰箱中保存24h，从冰箱中取出陈化30min即可测定。

2.用TA-XT2i质构仪(Stable Micro Systems，英国)进行TPA测定，选用直径为10mm圆柱状平头冲头。前进速度：2.0mm/s，冲压速度：1mrnfs；后撤速度：2mm/s，冲压深度：10mm；每个样品一次测定过程中探头下压两次，重复测定3次取平均值得到凝胶质构参数。

方法四：1.准确称量蛋白粉12g，以12∶88盐水比加入乳化机，先加蛋白粉，再加盐水，搅拌3分钟。

2.离心：将搅拌好的凝胶倒入250ml的离心杯中，以2500r/min、5min设定离心机，离心完毕去掉上层泡沫，转移至玻璃离心管中，要求不可挂壁。然后加盖密封转移至80℃左右的水浴锅中，要求水位没过胶体，30min。

3.冷却：以冷凝水位与凝胶高度相齐为准，35分钟后取出，用钢勺沿壁取出胶体，不可破裂，保持形状，切下表面0.5mm干化层，用物性测试仪测定。

缺点：操作需要实验人员具有较高的经验，而且实验数据稳定性低

发明内容

本发明的目的是为了解决现有几种蛋白凝胶测定方法存在的蛋白凝胶检测的针对性比较低，实验检测结果的稳定性不好，实验方案繁琐，适用性不高，操作需要实验人员具有较高的经验等问题，并提供一种新的蛋白凝胶测定方法，它可以更有效的提高凝胶的稳定性，使测定结果准确，快速，操作方法简单易学，科学实际。

本发明解决其问题所采用的技术方案是：蛋白凝胶的测定方法，包括以下步骤：准备工作、试剂准备、均质处理、真空、充填、、加热、冷却、测量。将称量好的蛋白粉和5℃左右的冷却水缓慢倒入搅拌机充分搅拌1分钟，20秒停一次，每次停止间隙测定其pH值及其温度。将均质处理好的蛋白质全部转移到大样品袋中，然后进行抽真空。将真空后蛋白充填到模具中，每个样品做三个平行样。将充填好的模具放入水浴锅中加热。将加热后的模具立即放入冷水中进行冷却。冷却好的胶体用物性测试仪的TPA GEL EM方法进行测定，记录Hardness(硬度)和Chewiness(咀嚼性)。

所述的蛋白凝胶测定方法，搅拌前蛋白粉和水的添加顺序应是先添加水后添加蛋白粉，以防止蛋白粉粘在杯壁，影响其均质效果。

所述的蛋白凝胶测定方法，加热时温度应保持在80℃左右，水浴时间严格控制在30分钟。

所述的蛋白凝胶测定方法，冷却水温度5℃左右，冷却1小时左右。

TPA GEL EM方法设定的参数

Pre-Test-speed      5.00mm/sec

Test-speed          5.00mm/sec

Post-Test-speed     10.00mm/sec

Distance            15.00mm

探头直径            15mm

探头高度            40mm