[发明专利]一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及饲料及食品中的三聚氰胺含量的快速检测技术领域，具体为一 种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡及其制备方法。

(二)背景技术

三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原 料，简称三胺，又叫蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。三聚氰胺是一种用途 广泛的基本有机化工中间产品，最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂 (MF)的原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，常被人为添加进动物饲 料及植物蛋白中以提高产品中蛋白质含量，而长期或反复大量食用含有三聚氰 胺的饲料或食物，会造成动物或人类生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石， 并可进一步诱发膀胱癌。因此，有必要对饲料及食品中的三聚氰胺的含量进行 检测，目前采用较多的有高效液相色谱法，该方法具有很好的灵敏度和特异性， 但操作繁琐、耗时长，不用适于对大批量样品的检测，且需要昂贵的仪器设备， 检测成本高；也可以采用酶联免疫吸附法检测，此方法虽然操作相对简单，不 需要昂贵的仪器设备，检测成本低，但是在检测过程中需要重复多次洗涤，而 且要借助于酶标仪读数进行测定，不能实现真正的一步法快速检测。

(三)发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡，能 够满足现场快速检测的需要，检测快速，携带方便，操作简单，无需特殊设备 和仪器，为此本发明者还提供了快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡的制备方法， 其制备工艺简单，成本低。

一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡，其包括试纸条，所述试纸条封装 于检测卡壳体中，所述检测卡壳体上开有加样孔和观测孔，所述试纸条包括底 板，其特征在于：所述试纸条的底板上依次粘贴有吸水纸、硝酸纤维素膜、金 标垫、样品垫，所述吸水纸和所述金标垫分别粘贴在所述硝酸纤维素膜两端， 在所述硝酸纤维素膜的两端结合处，所述吸水纸和金标垫的一小段重叠压在所 述硝酸纤维素膜上，所述样品垫粘贴在所述金标垫的另一端，所述样品垫的一 小段重叠在所述金标垫上；所述金标垫上喷涂有金标抗三聚氰胺单克隆抗体； 所述硝酸纤维素膜上依次喷涂有材质为三聚氰胺-卵清蛋白偶联结合物的检测 线、材质为羊抗鼠IgG的质控线。

其进一步特征在于：所述样品垫位置正对所述加样孔，所述硝酸纤维素膜 位置正对所述观测孔。

一种快速检测三聚氰胺的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：其包括 以下步骤：

(1)用碳二亚胺法偶联三聚氰胺半抗原与卵清蛋白，形成偶联物三聚氰胺-卵 清蛋白作为人工抗原；

(2)用免疫原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细 胞，筛选能够稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株，制备抗三聚氰胺单克 隆抗体；

(3)制备胶体金溶液；

(4)用制备好的胶体金溶液标记抗三聚氰胺单克隆抗体；

(5)用制备好的包被抗原以及羊抗鼠IgG处理硝酸纤维素膜；

(6)用制备好的金标抗三聚氰胺单克隆抗体处理金标垫；

(7)组装金标试纸条。

其进一步特征在于：

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制备：称取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分别加 入10％～20％的琥珀醛酸溶液和氰基硼氢化钠，室温下搅拌反应该混合物1小时 ～3小时，然后低温浓缩至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰 胺(DMF)溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)，搅拌反 应20分钟后，将该反应液滴加至卵清蛋白(OVA)溶液中，立即加入N-羟基 硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)，室温下搅拌过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)透析 24小时～72小时，冷冻干燥后于-20℃～-40℃保存；上述反应成分的比例为：三 聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氢化钠＝(10～1000)mg：(50～8000)μl：(6-600)mg， 半抗原：EDC：OVA：NHS＝(10～2000)mg：(5～10000)mg：(10-2000)mg： (20～5000)mg；