[发明专利]一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡，其包括试纸条，所述试纸条封装于检测卡壳体中，所述检测卡壳体上开有加样孔和观测孔，所述试纸条包括底板，其特征在于：所述试纸条的底板上依次设置有吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫，所述吸水纸和所述金标垫分别设置在所述硝酸纤维素膜两端，在所述硝酸纤维素膜的两端结合处，所述吸水纸和金标垫的一小段重叠压在所述硝酸纤维素膜上，所述样品垫设置在所述金标垫的另一端，所述样品垫的一小段重叠在所述金标垫上；所述金标垫上喷涂有金标抗三聚氰胺单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上依次喷涂有材质为三聚氰胺-卵清蛋白偶联结合物的检测线、材质为羊抗鼠IgG的质控线；

所述胶体金检测卡的制备包括以下步骤：

⑴用碳二亚胺法偶联三聚氰胺半抗原与卵清蛋白，形成偶联物三聚氰胺-卵清蛋白作为包被抗原；

⑵用三聚氰胺-牛血清白蛋白偶联抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株，制备抗三聚氰胺单克隆抗体；

⑶制备胶体金溶液；

⑷用制备好的胶体金溶液标记抗三聚氰胺单克隆抗体；

⑸用制备好的包被抗原以及羊抗鼠IgG处理硝酸纤维素膜；

⑹用制备好的金标抗三聚氰胺单克隆抗体处理金标垫；

⑺组装金标试纸条；

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制备，称取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分别加入10%~20%的琥珀醛酸溶液和氰基硼氢化钠，室温下搅拌反应该混合物1小时~3小时，然后低温浓缩至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC），搅拌反应20分钟后，将该反应液滴加至卵清蛋白（OVA）溶液中，立即加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS），室温下搅拌过夜，磷酸盐缓冲液（PBS）透析24小时~72小时，冷冻干燥后于-20℃~-40℃保存；上述反应成分的比例为：三聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氢化钠= (10~1000)mg ：(50~8000) μl ：(6~600)mg，半抗原：EDC：OVA：NHS = (10~2000)mg ：(5~10000)mg ：(10~2000)mg：（20~5000）mg。

2.根据权利要求1所述一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡，其特征在于：所述样品垫位置正对所述加样孔；所述硝酸纤维素膜位置正对所述观测孔。

3.一种快速检测三聚氰胺的胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：

⑴用碳二亚胺法偶联三聚氰胺半抗原与卵清蛋白，形成偶联物三聚氰胺-卵清蛋白作为包被抗原；

⑵用三聚氰胺-牛血清白蛋白偶联抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交融合，制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株，制备抗三聚氰胺单克隆抗体；

⑶制备胶体金溶液；

⑷用制备好的胶体金溶液标记抗三聚氰胺单克隆抗体；

⑸用制备好的包被抗原以及羊抗鼠IgG处理硝酸纤维素膜；

⑹用制备好的金标抗三聚氰胺单克隆抗体处理金标垫；

⑺组装金标试纸条；

所述三聚氰胺-卵清蛋白的制备，称取三聚氰胺，溶于吡啶溶液中，分别加入10%~20%的琥珀醛酸溶液和氰基硼氢化钠，室温下搅拌反应该混合物1小时~3小时，然后低温浓缩至干，得半抗原，取此半抗原，溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中，滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC），搅拌反应20分钟后，将该反应液滴加至卵清蛋白（OVA）溶液中，立即加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS），室温下搅拌过夜，磷酸盐缓冲液（PBS）透析24小时~72小时，冷冻干燥后于-20℃~-40℃保存；上述反应成分的比例为：三聚氰胺：琥珀醛酸：氰基硼氢化钠= (10~1000)mg ：(50~8000) μl ：(6~600)mg，半抗原：EDC：OVA：NHS = (10~2000)mg ：(5~10000)mg ：(10~2000)mg：（20~5000）mg。