[发明专利]诱导肝卵圆细胞向胆管细胞分化的方法及其专用培养基

权利要求书

1、用于体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的培养基，是在RPMI1640培养基的基 础上添加了1-6％胎牛血清，1-3％B27和0.05-0.15％青-链霉素。

2、根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基中胎牛血清的含量为 5％，B27的含量为2％，青-链霉素的浓度为0.1％。

3、一种体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的方法，包括以下步骤：

1)将RhoA基因活性突变体导入卵圆细胞WB-F344，得到高表达RhoA基因活性突 变体的WB-F344细胞；

2)将高表达RhoA基因活性突变体的WB-F344细胞接种于权利要求1或2所述体外 诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的专用培养基中，在37℃、5％ CO₂下培养，得到胆管 细胞。

4、根据权利要求3所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤1)中的RhoA基因活 性突变体具有序列表中序列1的核苷酸序列。

5、根据权利要求3或4所述的诱导方法，其特征在于：通过含有RhoA基因活性突 变体的重组真核表达载体或利用慢病毒载体系统将RhoA基因活性突变体导入WB-F344 细胞。

6、根据权利要求5所述的诱导方法，其特征在于：所述利用慢病毒载体系统将 RhoA基因突变体基因导入WB-F344细胞的方法，包括以下步骤：

A)将RhoA基因突变体基因导入慢病毒载体系统中的目的基因转移载体中，得到携 带有RhoA基因突变体基因的重组慢病毒载体；

B)将携带有RhoA基因突变体基因的重组慢病毒载体与慢病毒载体系统中的两种包 装质粒和包膜质粒按4.5-5.5：3.7-4.7：1.5-2.5：2.3-3.3的重量份数比混合后，用 脂质体介导法转染慢病毒包装细胞，得到携带有RhoA基因突变体基因的重组慢病毒；

C)将携带有RhoA基因突变体基因的重组慢病毒转染WB-F344细胞，得到表达 RhoA基因突变体的WB-F344细胞。

7、根据权利要求6所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤A)中的慢病毒载体系 统中的目的基因转移载体为pBPLV。

8、根据权利要求6所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤B)中的慢病毒载体系 统中的两种包装质粒为pLP1和pLP2；包膜质粒为pLP/VSVG；慢病毒包装细胞为293-FT 细胞。

9、用权利要求3-8任一项所述方法诱导得到的胆管细胞。