[发明专利]石斛色谱指纹图谱测定方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种应用色谱指纹图谱技术，对药用石斛中提取的含酚类和 黄酮类的化学成分制订色谱指纹图谱测定方法，以便于在原料采购、产品生 产工艺流程中的各个步骤的质量进行监控。

【背景技术】

石斛是一类常用的贵重中药材，历代本草和各版药典均有收载，中外学 者对多种石斛的化学成分进行了研究和探索，发现该属植物所含的化学成分 类型多样，包括多糖类、生物碱、黄酮类、醌类、倍半萜类、香豆素类及甾 体糖苷类化合物等成分。近年来，众多学者对从多种石斛属植物中分离得到 的成分进行了药理活性研究和临床应用。酚类化合物和黄酮类化合物是石斛 中的主要活性成分之一，如石斛中异黄酮类化合物异甘草苷，具有清除自由 基、抗氧化的活性(罗丹等，2006)，因此，采用现代质控方法，制订石斛中 酚类和黄酮类化学成分质量控制标准是石斛生产厂家重点考虑的。而目前尚 没有采用高效液相(HPLC)指纹图谱技术对石斛酚类和黄酮类化合物进行质 量控制的报道，因此，本方法对控制石斛原料和产品的质量有重要意义。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有质量控制技术的不足之处，且方法简单，可 以方便快捷得到色谱图，并可利用该指纹图谱全面监控石斛的质量，以确保 产品质量稳定的石斛色谱指纹图谱测定方法。

本发明的目的是这样实现的：

石斛色谱指纹图谱测定方法，步骤如下：

①、将药用石斛剪断后，低温干燥，粉碎，过筛备用；

②、取适量样品于锥形瓶中，添加适量一元醇，超声20min，过滤，滤渣 用一元醇淋洗多次，合并滤液，滤液挥至近干，

③、用一元醇溶解，定容，再用0.45μm微孔滤膜过滤后作为供试品溶液；

④、分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行分 析；

上述步骤中检测条件为：

色谱柱：C₁₈柱(ODS柱)

流速：1ml/min

检测波长：254nm

柱温：25℃

流动相：乙腈(A)-1‰醋酸(B).

洗脱梯度：5％→32％A(0→30min)，32→65％A(30→55min)，65→ 32％A(55→60min)。

如上所述的石斛色谱指纹图谱检测方法，其特征在于步骤①中过筛是过 40-300目筛。

如上所述的石斛色谱指纹图谱测定方法，其特征在所述的于一元醇为甲 醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇中的任意一种。

如上所述的石斛色谱指纹图谱测定方法，其特征在于所述的药用石斛为 金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、环草石斛D.loddigesii Rolfe.、黄 草石斛D.chrysanthum Wall.、马鞭石斛D.fimbriatum Hook.Var.oculatum Hook.、铁皮石斛D.candidum Wall.ex Lindl.中的任意一种。

本发明与石斛传统的质量控制方法相比，有如下突出优点：

1、可以方便快捷的得到色谱图，而且原材料易得，工艺简单，技术先进。 据文献记载，可以作为药用石斛的石斛属植物有近100种。传统的质量控制 方法，如外观性状鉴定、显微鉴定、薄层鉴别、生物碱和总多糖含量测定等 方法并不能满足上述近缘种鉴别的要求。而上述药用石斛的药用价值并不相 同，造成了市场上石斛药材质量的参差不齐、以次充好的状况。

中药色谱指纹图谱技术通过多成分、多指标来控制产品的质量，相比上述质 量控制指标，结果更加可靠，原材料易得，工艺简单。

2、酚类和黄酮类为药用石斛的有效部位之一，因此本发明制订指纹图谱 质量控制方法，能有效表征药用石斛的质量。

3、本发明采用高效液相色谱法(HPLC)制订了药用石斛的指纹图谱，与 采用气相色谱法(GC)和分子生物学方法相比，本发明操作方法简单、分析 速度快、成本低、重现性好，特别适合大批量样品的分析。

4、利用本发明的测定方法，可得到石斛样品的指纹图谱色谱图。再借助 计算机相似度辅助评价软件，将样品图与共有模式图谱比较，通过相似度计 算，即可评价原料品种、产地、真伪优劣，以及判断产品质量的稳定性。

【附图说明】