[发明专利]利用相对校正因子测定化合物含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用相对校正因子测定化合物含量的方法，具体涉及用高效液相色谱 法测定容易发生构型转化的化合物含量的方法。

背景技术

许多具有生物活性的物质都具有一个或多个手性中心，存在多种异构体。即使单一异 构体化合物，在一定的条件下，如制备成溶液或在适当的温度下，单一异构体也会发生转 化，尤其是在溶液中加热或冷却情况下。

尤其是药物制成非固体制剂，因药物处于非固体基质或溶液中，对于有手性中心的药 物，往往容易发生构型转化，且不同的条件下(如溶剂不同，或温度不同时)，转化程度不 一。这给药物标示含量的测定带来了较大难度。

如用于治疗寻常性银屑病的卡泊三醇(化学名为(5Z，7E，22E，24S)-24-环丙基-9，10-开环 胆甾-5，7，10(19)，22-四烯-1α，3β，24-三醇)，制备成溶液后会部分转化为异构体前卡泊三醇， 两种异构体均为卡泊三醇药物制剂中的有效成分。

卡泊三醇                               前卡泊三醇

前卡泊三醇和卡泊三醇可以互相转化，在不同溶剂中转化程度不一。卡泊三醇及前卡 泊三醇的紫外吸收系数也不同。

丹麦利奥制药有限公司测定卡泊三醇制剂标示含量的方法比较耗时，需要将提取的样 品溶液在75℃条件下保温2小时后，方可用高效液相色谱法测定。

因此非常需要找到一种方法，能够得到转化异构体含量的相对校正系数，测定含量后 通过校正便可以得到比较准确的待测物含量。

发明内容

本发明的目的是建立一种测定易于在溶液中发生构型转化的化合物含量的简便方法，

本发明通过测算已转化的异构体的相对校正因子，达到了上述发明目的。

详述本方法如下：

一种用高效液相色谱法测定溶液中易发生构型转化的化合物含量的方法，特征为：

取待测化合物样品溶液，测定已转化的异构体和未转化的异构体的峰面积，将已转化 的异构体峰面积乘以相对校正因子C，再加上未转化的异构体的峰面积，由此结果计算出 待测化合物标示含量；

所述相对校正因子C通过以下步骤测算：

①配制待测化合物标准品溶液，立即测定未转化异构体的初始峰面积A₀；

②分别测定待测化合物标准品配制溶液后若干个不同时刻未转化的异构体的峰面积 A_t和已转化的异构体的峰面积B_t，所述若干是3-10；

③按下式分别计算各不同时刻相对校正因子C_t：C_t＝(A₀-A_t)/B_t；

④计算C_t平均值，得到相对校正因子C。

本发明人用上述方法测定卡泊三醇制剂中卡泊三醇标示含量，取得了满意的结果，与 现有技术方法相比，测定的标示含量结果吻合。其步骤为：

1、测算前卡泊三醇相对校正因子：

①配制卡泊三醇标准品溶液，立即测定卡泊三醇的初始峰面积A₀；

②配制卡泊三醇标准品溶液后，分别选3-5个不同时刻测定卡泊三醇的峰面积A_t和 前卡泊三醇的峰面积B_t；

③按下式分别计算各不同时刻相对校正因子C_t：

C_t＝(A₀-A_t)/B_t     (式1)

④计算C_t平均值，得到相对校正因子C。

在本方法中，高效液相色谱的色谱柱和流动相不同，相应的相对校正因子C不同。

本发明用上述方法进行了两种色谱条件下前卡泊三醇相对于卡泊三醇的相对校正因子 测算：

其中，色谱条件1：乙腈-水(50～60:40～50)(V/V)为流动相，色谱柱为ZORBAX SB-C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱温为40℃，流速为1.0ml/分钟，所测相对校正因子是2.02；