[发明专利]抗口蹄疫病毒的单克隆抗体及其识别的抗原表位和应用

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及抗亚洲1型FMDV的中和性单克隆抗 体和抗O型FMDV的中和性单克隆抗体，本发明还涉及上述单克隆抗体所识 别的中和表位，本发明进一步涉及所述的单克隆抗体和中和表位在预防口蹄 疫中的应用，属于口蹄疫的防治领域。

背景技术

口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒 科口蹄疫病毒属的成员，为单股正链RNA，其基因组RNA全长约8.5kb。口蹄 疫是严重危害偶蹄动物的重要传染病之一，该病引起幼畜死亡、产奶量下降、 肉食减少、肉品下降、动物的生产性能降低，导致巨大的经济损失。此外， 由于贸易的限制和禁止而引起的损失更大，全世界每年由此造成的直接经济 损失可达数百亿美元。2005年以来在我国江苏、山东、甘肃、北京、河北等 地爆发了Asia1型FMD(As ia1/JS/CHA/05，GenBank登录号：EF149009)， 由于在我国江苏省首先分离，被称作Asia1型江苏谱系。该谱系口蹄疫病毒 在我国牛群中一经流行，传播趋势迅猛，造成的损失极为严重。本世纪初0 型口蹄疫病毒泛亚谱系在中国(O/Tibet/CHA/99，GenBank登录号：AJ539138) 及周边国家甚至欧洲(Mason PW et al.J Gen Virol.2003，84(Pt6)：1583-93) 均有流行，给许多国家造成巨大损失。因此，积极开展Asia1型和O型口蹄 疫(FMD)的研究，对我国FMD的防控具有重要的意义。

口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂，不同血清型、基因型和分离株的口蹄 疫病毒其抗原表位和抗原位点都不尽相同，存在广泛的抗原变异。利用单抗 逃逸突变株序列分析和交叉中和试验，已鉴定了一些不同血清型FMDV的抗 原位点，相关的研究主要来自O、A、C和Asia1型FMDV。中和性抗体在保 护易感动物抵抗口蹄疫病毒感染过程中起主导作用，诱导机体产生中和性抗 体的抗原位点主要位于各个血清型FMDV的VP1上，VP1的G-H环是病毒 最重要的中和性抗原位点所在，该环中既存在线性表位，又存在构象型表位。 在O型FMDV的VP1蛋白中，G-H环133-157aa和C-末端200-213aa的线性 表位组成重要的抗原位点1。Saiz等报道，FMDVA5亚型有2个中和性抗 原位点，一个是线性表位，位于VP1的C-末端，关键残基在198aa，另一个 位于VP2的B-C环上，由2个表位组成，包括72aa和79aa。Santina Graziolideng 用大量单抗进一步确定，Asia1型FMDV存在4个中和性抗原位点：位点1 位于VP1的142aa，与O型VP1的144aa相对应，在保守的RGD基序侧翼； 位点2位于VP2的B-C环区，包括67、72、74、77和79aa等多位残基，而 且与VP1的49aa和207aa相关联；位点4位于VP3的B-B结节上，关键残 基为58aa和59aa，该位点与位点2相关联；位点5位于VP3的C-末端，作 为一个新发现的独立位点被首次提出，218aa为关键性残基。国外这些研究是 用单克隆抗体压力筛选或用合成肽扫描技术，只能确定表位相关氨基酸或肽 段，不能精确确定表位的性质和位置。我国已有Asia1型和O型FMDV中和 活性单克隆抗体的文章发表，然而尚未见到中和表位的研究报道，因此，这 些已发表中和性单克隆抗体的功能性和价值尚不清楚。

发明内容

本发明目的之一是提供一株能分泌抗亚洲1型FMDV的中和性单克隆抗 体的杂交瘤细胞系；

本发明目的之二是提供一株能分泌抗O型FMDV的中和性单克隆抗体的 杂交瘤细胞系；

本发明目的之三是分别提供由上述中和性单克隆抗体所识别的亚洲1型 FMDV中和表位氨基酸序列和O型FMDV中和表位氨基酸序列；

本发明目的之四是将上述单克隆抗体或中和表位用于诊断或预防口蹄 疫。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一株能分泌抗亚洲1型FMDV的中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其 微生物保藏号是：CGMCC No.2692；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物 研究所；保藏日期：2008年10月08日；由该杂交瘤细胞系所分泌的抗亚洲 1型FMD的中和性单克隆抗体，分类命名为：3E11；