[发明专利]乙肝病毒前S1抗原快速诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫诊断技术，具体地说是一种乙肝病毒前S1抗原快 速诊断试剂盒及其制备方法。用于快速检测人血清或血浆中乙肝病毒前S1 抗原。

背景技术

我们知道，乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性疾病， 我国是乙型肝炎的高发国。40-60％的人群感染过HBV，9-10％的人群为HBV 表面抗原(HBsAg)携带者，对这一亿多的HBsAg阳性者作为传染源的意义 作出评估，才能比较公平地对待他们对社会活动的参与。

通过对HBV病毒颗粒结构进行分析发现，其外膜蛋白包括S、前S2和 前S1三种成分。前S1蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上，在病毒感 染、装配、复制、侵入肝细胞过程和刺激机体产生免疫反应中起重要作用； 临床研究也发现，前S1蛋白在HBV感染的最早期出现并与血清HBV-DNA、 HBeAg及肝内HBcAg高度相关，其在病毒性乙型肝炎的临床诊断，指导治 疗等方面有重要价值。

首先，乙肝病毒前S1抗原的检测是早期诊断乙型肝炎病毒感染的指标。 因为前S1抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期，在转氨酶升高前即可查 出，因而用于乙肝病毒感染的早期诊断，尤其是在体检和献血员中加查前S1 抗原，在疾病的早期诊断和尽早切断传染原方面有重要意义。

其次，乙肝病毒前S1抗原是反映HBV感染和复制状况的指标。前S1 抗原与HBV-DNA，HBeAg检测率高度符合，提示前S1抗原可作为HbeAg 和HBV-DNA检测的补充和对照；HBeAb(+)慢性乙型肝炎(约占患者的30％ 左右)和HBV慢性无症状携带者中，前S1抗原(+)可表示病毒的复制， 提示临床上只检测“乙肝五项”是不够的，补充前S1抗原的测定是十分重要 的，可弥补因病毒变异和其它原因造成的HBeAg(-)的“误导”；病毒附着 于肝细胞上，最重要的介导部位是前S1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段， 变异的病毒只要这一区段完好就有传染性。

再者，乙肝病毒前S1抗原的检测可用于预后及药物疗效的判断。急性 乙型肝炎患者前S1抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象，反 之，前S1抗原持续阳性，将发展至慢性肝炎；因病毒基因变异的HBeAb(+) 慢性乙型肝炎病人，较易进展为肝硬化，甚至肝癌，加强检测前S1抗原， 是一种检测疾病预后的良好手段；前S1抗原可作为药物抗病毒疗效的指标， 是对HBV-DNA和HBeAg指标的补充和加强。

随着对乙肝病毒前S1抗原蛋白特有性质的研究及其在乙肝发病机理、乙 肝病毒感染和复制等方面研究的深入，发现了越来越多前S1抗原在HBV分子 生物学上的重要意义。在与肝细胞受体结合、调节HBVcccDNA(covalently closed circular DNA)，合成、转化病毒与细胞基因表达活性、调节机体免疫 和对疫苗的免疫应答、导致肝炎以及在病毒装配和传染性等方面的重要作用 越来越受到人们重视。大量的临床与实验室研究表明：应用前S1抗原检测试 剂对乙肝病毒建立一种科学、灵敏、重复性好的血清学检测对临床诊断与指 导治疗具有越来越重要的意义。

目前对乙肝病毒前S1抗原的检测方法主要为酶联免疫吸附法和化学发 光法。二者对于乙肝病毒前S1抗原的检测虽然是比较准确和敏感的，但是 也存在如下的缺点：(1)检测需要专门的仪器设备辅助如酶标仪和化学发光 检测仪，不利于实行现场直接检测；(2)操作过程相对比较复杂，检测所需 要的时间比较长，而且需要经过专业技术培训的技术人员操作。(3)一般不 能实现单人份的检测。

为满足临床快速检测的需要，近年来发展了多种简便、快速的免疫学检 测方法，胶体金法即为其中一种，胶体金技术是九十年代发展起来的快速诊 断分析技术，近几年新发展的胶体金快速测定试纸条主要适用于急诊检验、 小型化验室或家中自测，已成为21世纪检验医学一个重要的发展方向。胶体 金免疫层析技术是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原 抗体反应的一种新型的免疫标记技术。层析过程中，金标记物与事先固相化 于层析材料如硝酸纤维素膜上的抗原或抗体发生特异性的免疫反应而被截 留，进一步富集，形成肉眼可见的紫红色条带，从而得到直观的实验效果， 达到快速检测的目的。