[发明专利]乙肝病毒前S1抗原快速诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种乙肝病毒前S1抗原快速诊断试剂盒的制备方法，试剂盒的卡盒中含有乙肝病毒前S1抗原检测试纸条，所述试纸条是由样品垫、金标垫、反应膜和吸水层依次粘贴在衬卡上，试纸条选择玻璃纤维做样品垫，吸水纸做吸水层，有粘附作用的纸卡做衬卡；所述金标垫是由胶体金标记的抗-HBs多克隆抗体载于玻璃纤维垫上制成，所述反应膜是在硝酸纤维膜上包被抗-S1单克隆抗体制成检测线，同时包被重组乙肝表面抗原制成质控线；具体制备方法包括以下步骤：

（a）金标垫的制备  其是将胶体金标记的抗-HBs多克隆抗体载于载体玻璃纤维垫上，在硅化处理后的玻璃容器中加入浓度为0.01%的氯金酸，加热至沸腾，搅动下按照体积比100:2加入浓度为1%的柠檬酸三钠，继续煮沸25分钟，冷去后用超纯水恢复到原体积，制成直径为25nm左右的胶体金颗粒，用0.1M K₂CO₃溶液调节胶体金pH为7.0，将胶体金与抗-HBs多克隆抗体混合，调节比例使抗体的最终浓度为3-6μg/ml，室温震荡反应30分钟，然后加入5% PEG20000至终浓度为0.25%，混匀后室温静置5分钟，15000rpm离心30分钟后，弃去上清，加入与胶体金等体积的洗脱液充分溶解沉淀物，同样转速离心，弃去上清后，将沉淀用1/10初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，4℃保存待用，用其包被玻璃纤维，每毫升胶体金标记抗体铺约10-15平方厘米的玻璃纤维垫，冷冻真空干燥后，分别切成0.4-0.6 cm²金标垫块；所述洗脱液的组成配方为：pH 9.3的Tris-HCl 0.05M、BSA 10g/L；所述保存液的组成配方为：pH 9.3的Tris-HCl0.05M、蔗糖5g/L、BSA 5g/L、甘氨酸1g/L、吐温20 0. 1ml/L、硫柳汞钠0. 5g/L、酪蛋白2g/L；

（b）反应膜的制备 其是在硝酸纤维膜上包被抗-S1单克隆抗体制成检测线，同时包被重组乙肝表面抗原制成质控线，选择0.01M pH7.5磷酸盐缓冲液作为包被液，所述包被液的组成配方为：Na₂HPO₄·12H₂O 2.68g 、Na H₂PO₄·2H₂O 0.39g、超纯水1000 ml；检测线包被的抗-S1单克隆抗体浓度为0.8-1.2mg/ml，质控线包被的重组乙肝表面抗原的浓度为0.5-1.0mg/ml，先用包被液冲洗划膜仪管道，设定划膜仪移动速度和包被浓度，然后加入检测线抗体和对照线抗原，在硝酸纤维膜上划线，检测线位于膜中间位置，质控线在检测线上方，二者的宽度为0.7-1mm且质控线和检测线相距4-5mm，包被后膜置室温晾40分钟，封闭液中浸泡5分钟，室温晾40分钟，保存待用；所述封闭液的组成配方为：BSA 20g、NaN₃ 0.5g、0.01M pH7.5 PB 1000 ml；

（c）试纸条的组装 将所述样品垫切成长度30cm和宽度28mm，金标垫切成长度30cm和宽度10-15mm，反应膜切成长度30cm和宽度25mm，水层剪切成长度30cm和宽度27mm，然后依次将其贴在衬卡上，组成大板后，切割成长度8cm和宽度3mm的单个人份试纸条，最后装入卡盒内。