[发明专利]一种抗猪细小病病毒的转移因子及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物及其制剂领域，更具体地说，是涉及一种抗猪细小病病毒的转移因子及其制备方法。

背景技术

猪细小病病毒病(porcine parvovirus infection，PPI)又称猪繁殖障碍病。是由猪细小病病毒引起的一种猪的繁殖障碍病。以怀孕母猪发生流产、死产、产木乃伊为特征。

各种不同年龄、性别的家猪和野猪均易感。传染源主要来自感染细小病毒的母猪和带毒的公猪，后备母猪比经产母猪易感染，病毒能通过胎盘垂直传播，感染母猪所产的死胎、仔猪及子宫内的排泄物中均含有很高滴度的病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒排毒时间很长甚至终生。。感染种公猪也是该病最危险的传染源，可在公猪的精液、精索、附睾、性腺中分离到病毒，种公猪通过配种传染给易感母猪，并使该病传播扩散。

污染的猪舍是猪细小病病毒的主要储藏所。在病猪移出、空圈4.5个月，经彻底清扫后，再放进易感猪，仍可被感染。污染的食物及猪的唾液等均能长久地存在传染性。

仔猪、胚胎、胎猪通过感染母猪发生垂直感染；公猪、肥育猪和母猪主要是经污染的饲料、环境经呼吸道、生殖道或消化道感染；初产母猪的感染多数是经与带毒公猪配种时发生的；鼠类也能传播本病。

该病具有很高的感染性，易感的健康猪群-旦病毒传入，3个月内几乎可导致猪群100％感染；感染群的猪只，较长时间保持血清学反应阳性。该病多发生于春、夏季节或母猪产仔和交配季节。母猪怀孕早期感染时，胚胎、胎猪死亡率可高达80％～100％。母猪在怀孕期的前30～40天最易感染，孕期不同时间感染分别会造成死胎、流产、木乃伊、产弱仔猪和母猪久配不孕等不同症状。病毒的感染率与动物年龄呈正比。

病变主要在胎儿，可见感染胎儿充血、水肿、出血、体腔积液、脱水(木乃伊化)及坏死等病变。

该病目前尚无有效治疗方法，主要采取预防措施。可对种猪，特别是后备种猪进行疫苗接种预防该病。

尽管目前市场上有一些抗猪细小病的临床用药，但是现有药剂的争对性不强，疗效有限，而且，治疗性制剂多是发病后采用的，不能起到预防的作用。对于易感染猪细小病的猪群。每年定期的对猪接种猪细小病病毒疫苗是预防猪细小病的有效方法，其次应增强营养或药物干预，提高自身免疫力，通过药物提高机体抵抗力或免疫力也是一种预防猪细小病的有效方法。

转移因子(TF，Transfer Factor)是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物，具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用，被誉为T细胞活性的触发剂，细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。转移因子分子量小、无毒、无抗原性、不起过敏反应，不产生对抗抗体且可超越种系界限应用等优点。自美国著名的免疫学专家Lawrence发现和研究转移因子以来，世界各国不但进行了许多理论研究，而且进行了大量的临床应用研究，使得转移因子成为目前应用广泛的增强免疫制剂。

目前已报道的提取的转移因子大多数都是关于非特异性转移因子的制备方法。本发明采用病毒免疫抗原的方法提取特异性的转移因子，提取方法在已报道的传统方法基础上加以改进，缩短生产时间，简化生产工艺。

采用特殊的病毒免疫抗原提取抗猪细小病病毒的转移因子，具有重要的理论和现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，提供一种天然高效的抗猪细小病病毒的转移因子及其制备方法。

本发明的第一个目的是提供一种简单有效的抗猪细小病转移因子的制备方法，步骤包括：

(1)先用注射用水洗净用猪细小病病毒抗原免疫过的猪脾脏，去其表面的筋膜、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；

(2)将洗净的猪脾脏剪碎，加入1～2倍冷的10mmol PBS缓冲液，用高速组织捣碎机1000～3000rpm捣碎3～5次，每次3～5min，制得猪脾匀浆液；

(3)猪脾匀浆液用超声波(4KW、3KHz)处理5～10min；

(4)将步骤(3)中得到的匀浆液用HCl调pH5.0～6.0或者加入0.1～0.3％柠檬酸，4℃，3000～8000rpm离心10～30min，收集上清液；

(5)上清液用0.2μm中空纤维柱微滤，滤出液再用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维柱超滤，收集滤出液；

(6)将超滤得到的滤液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，即得到抗猪细小病病毒转移因子原液，4℃保存。