[发明专利]检测猪繁殖障碍性病毒传染病病原的试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测猪病毒性传染病病原的器具，特别是涉及一种检测猪 繁殖障碍性病毒传染病病原的试纸条。

技术背景

我国是生猪的生产和消费大国。随着大中小型规模化养猪场、种猪场数量 的逐年增加，猪繁殖障碍性疾病已成为我国规模化猪场最重要的疾病之一，发 病率平均达30％以上，造成巨大的经济损失，并严重制约着养猪业的发展。猪繁 殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪乙型脑炎病毒(JEV)是造 成猪繁殖障碍的三种重要病毒。PRRSV引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，主要表 现为感染母猪发热，厌食，怀孕后期发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等，感 染仔猪发生呼吸困难(肺炎)、免疫机能障碍和高死亡率，因部分病猪的耳朵 发紫，又称蓝耳病。蓝耳病近年来在我国广为传播，如2006年我国南北10多个 省(市、区)的猪群发生的“高热病”现认为是高致病性PRRSV毒株引起，发病 猪群达200万头，死亡40万头。因此，PRRSV被认为是导致近年来猪肉价格上涨 的主要疾病之一。PPV引起猪细小病毒病，主要表现为受感染的母猪，特别是初 产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、死胎、畸形胎、木乃伊胎和弱仔以及 屡配不孕，而其他年龄的猪感染后不表现明显的临床症状。目前猪细小病毒病 在我国猪群中广为传播，在大多数感染猪场呈地方性流行并且很难净化，从而 造成了持续的经济损失，严重阻碍了养猪业的健康发展。JEV引起人畜共患病— 流行性乙型脑炎。猪乙型脑炎，主要表现为感染猪发热，厌食，母猪怀孕后期 突然发生流产、死胎、木乃伊胎和弱仔等，新生仔猪良莠不齐、死亡率高，感 染公猪出现睾丸炎。猪乙型脑炎主要由带病毒的蚊虫叮咬而传播，主要分布在 亚洲各国，我国大部分地区均有本病发生。

快速诊断是有效防控疾病的基础。但在生产中，PRRSV、PPV和JEV引起的繁 殖障碍性疾病，临床症状相似，而且经常混合感染，单凭临床病理变化往往不 能及时正确诊断，最后确诊有赖实验室检查，如检测病猪样品中病原或其特异 抗体的存在、甚至用分离到的病原复制出临床病例。目前实验室检测这三种病 毒的方法有：(1)病毒分离与鉴定，无菌取病猪样品接种肺泡巨噬细胞或 MarC-145细胞(对PRRSV)、猪传代肾细胞(对PPV和JEV)培养相应病毒，用酶 或荧光素印迹抗体检测细胞培养中的病毒，或用中和抗体鉴定病毒；(2)用间 接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PRRSV感染猪血清中的特异抗体，用血凝抑 制试验(HI)检测PPV或JEV感染猪血清中的特异抗体；(3)用反转录—聚合酶 链式反应(RT-PCR)检测细胞培养物或病猪样品中的PRRSV或JEV核酸，用PCR检 测细胞培养物或病猪样品中的PPV核酸。

病毒分离与鉴定和PCR检测技术操作复杂、需要仪器和较长的时间，不适合 生产或现场的快速诊断需要。ELISA和HI比病毒分离与鉴定和PCR技术简便、快 速，常用来检测PRRSV(ELISA)、JEV和PPV(HI)及其抗体，但仍不便于我国 基层或现场普遍推广应用。因为ELISA仍需要酶标仪和试剂，较复杂的操作步骤 和经验，HI也需要新鲜的豚鼠或鹅红血球；这些仪器、试剂在基层或者缺乏， 或者缺乏操作人员和保存条件。为此，有人研究报道了用斑点免疫金渗滤法来 检测PPV、JEV和PRRSV。这种方法利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗 原—抗体反应由ELISA或HI的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶 体金印迹代替酶印迹和红血球印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况而判断 结果，因此比ELISA和HI更简便、快速和实用。但目前报道的斑点免疫金渗滤法 一次只检测一种猪病病原，即使这样，也至少需添加2次试剂和洗涤2次才能获 得结果；如果要鉴别诊断上述三种猪病病毒，则同时需要多种试剂盒和十几个 操作步骤，非专业的基层人员使用仍显得不方便。

专利文献CN101216488A中公开了一种检测猪繁殖与呼吸综合症抗体的试纸 条及其制备方法，其是通过检测PRRSV抗体进行诊断，而不是直接检测病毒的存 在，并且只能间接地诊断三种主要的猪繁殖障碍性病毒中一种(PRRSV)，有很 大的局限性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种结果显示直观、准确的检测猪繁殖障 碍性病毒传染病病原的试纸条，该检测试纸条和斑点免疫金渗滤法一样特异、 敏感但操作使用更简便、快速和实用，且检测成本更为低廉。