[发明专利]多功能菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，具体地涉及一株多功能土壤芽孢杆菌及其应用。

背景技术

在我国，长期过量施用化肥导致了土壤板结、肥力退化等一系列问题。同时，人们对农产品的农药、化肥残留问题日益关注，绿色食品、有机食品受到市场的热捧。在这种大环境下，我国生物肥料产业得以迅速发展，生物肥料的年产量达到400万吨，在农业部登记的产品种类多达12个，包括根瘤菌肥料、固氮菌肥料、解磷菌类肥料、解钾菌类肥料等。

但是，目前市场上销售的生物肥料普遍存在着功能单一、质量不稳定、土壤适应性差等问题，从而限制了其规模化推广。克服上述问题的关键在于筛选出抗逆性强的多功能菌株。本发明正是基于此思路，经多年实验筛选出具备多种功能的土壤芽孢杆菌，并改进了现有的孢子粉生产工艺，实现了生物菌肥生产的突破。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一株多功能土壤芽孢杆菌，本发明的另一目的是提供利用该菌株生产孢子粉的方法。

(二)技术方案

本发明所述的土壤芽孢杆菌(Bacillus edaphicus)YZH-002，该菌株已于2008年2月25日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.2315。

本发明所述的土壤芽孢杆菌(Bacillus edaphicus)CGMCC No.2315，具备改善土质、分泌植物生长激素、防治病虫害等多种功能。

本发明提供了一种生产前述土壤芽孢杆菌孢子粉的方法，包括如下步骤：

(1)种子活化：挑取冷冻保藏的菌液，在固体培养基平板上划线，于30℃培养14-16h；然后挑取单菌落接种于液体培养基中，于30℃、250rpm振荡培养至OD_600nm＝1-1.5；

(2)芽孢生成：取步骤(1)所得菌液0.2mL，接种于装有固体培养基的克氏瓶中，涂匀，于30℃培养3-4天，直至培养基表面形成明显的菌苔，得到芽孢种子；

(3)接种种子罐：用无菌水冲洗菌苔，接种于灭过菌的种子罐，接种温度70-80℃，发酵参数设置为：温度30-35℃，罐压0.03-0.05MPa，通气量1∶0.2-0.3(m³/t/h)，pH 6.8-7.2，搅拌转数200-400rpm，培养时间20-24h；

(4)发酵培养：将步骤(3)得到的种子液输入发酵罐，发酵参数的设置同步骤(3)，培养时间28-34h；

(5)喷粉：将步骤(4)发酵得到的菌液输入贮存罐，按菌液∶碳酸钙＝1∶3-4的比例加入碳酸钙，搅拌混匀；然后进入喷雾塔，进口温度为180-220℃，出口温度为50-60℃，得到孢子粉。

上述方法中所用到的培养基的组成具体如下：

(1)活化菌种所用的培养基组成按质量百分比计为(用于种子活化和芽孢生成步骤)：

蛋白胨 5～10‰

葡萄糖 3～8‰

酵母粉 0.5～2‰

NaCl  3～6‰

KCl   0.5～1.5‰

MgSO₄·7H₂O  0.2～0.4‰

pH    7.0；

(2)发酵培养基按质量百分比计为(用于接种罐和发酵培养步骤)：：

玉米浆   1～10％

豆饼粉   0.5～5％

淀粉     0.5～5％

NH₂SO₄   0.01～0.3％

K₂HPO₄   0.01～0.1％

MgSO₄    0.1％

FeSO₄    0.01％

pH       7.0～7.2。

本发明所述的土壤芽孢杆菌可应用于制备生物有机肥、生态配方肥、生物农药以及土壤改良剂等生物制剂。相应地，本发明所述的孢子粉生产方法也可应用于上述制剂的生产。

(三)有益效果

本发明所述的土壤芽孢杆菌耐盐、耐热、抗逆性强，能够分泌吲哚丙酸、玉米素、赤霉素等多种植物激素，并能防治线虫及多种真菌病害，适用于生产生物有机肥、生态配方肥、生物农药以及土壤改良剂等生物制剂。同时，本发明提供的孢子粉生产方法有效减少了核心菌株的死亡率，使得存活率达93％以上，并将孢子粉的保质期提高到12个月以上。

附图说明：

图1、几丁质分解实验结果圈。