[发明专利]加强细胞生长抑制药凋亡作用的5－取代核苷的用途

说明书

本申请是申请号为200380110201.7之中国专利申请的分案申请，原申请200380110201.7是根据专利合作条约的国际申请(PCT/EP2003/013008)进入中国国家阶段的国家申请。

本发明涉及DNA修复基因和/或癌基因的至少一种超表达抑制剂用于生产提高化疗后细胞生长抑制剂的凋亡作用的药物的用途。

人类癌症是最常见的死亡原因，而化疗是最常用的治疗方法。化疗治疗治愈率不够高是由于耐药性的产生。这些耐药性的根源在于细胞生长抑制剂影响基因表达并且具有基因毒性作用，例如引起突变、基因扩增和重组，并因此使基因组不稳定。这样，化疗导致或选择耐药性癌细胞。通常癌基因如Ras、Bcl2、Bcr-abl、Myc、ErbB2等受细胞生长抑制剂所致效应的影响。错误受控的基因表达连同DNA修复和重组一起也导致化疗耐性(例如p53基因、BRCA1/2、UBE2N、APEX和Rad51)，此外代谢和生物激活细胞生长抑制剂的酶(例如DHFR、DT-黄递酶(DT-D))或运送细胞生长抑制剂的蛋白质(例如MDR1)也导致化疗耐性。

大多数细胞生长抑制剂消除肿瘤是因为其导致凋亡。凋亡是一种程序化细胞死亡的形式，首先记述在Kerr，J.F.et al.，Br J Cancer，26(4)(1972)；239-257中。与坏死相反，凋亡是细胞死亡的生理形式。这两种形式的细胞死亡可通过坏死和凋亡之间的差异来区分。凋亡具有连续发生有序级联事件的确定的形态学和生物化学特征。该连续过程可划分为多个阶段。凋亡的形态学特征为核染色质凝聚(核固缩)、细胞质收缩、凋亡囊泡和最终的凋亡小体形成。肿瘤细胞可以通过过度活化存活机制而防止凋亡。因此，化疗耐性还包含抗细胞凋亡作用基因，例如STAT3，即激活的“转录信号转导物和活化物3”，或者JUN-D。

1995年发现了此前未知的特定激素和5-取代核苷的作用。其抑制中国仓鼠细胞中2-氨基-6-巯基嘌呤(AMP)诱导的SV40扩增(Fahrig，R.et al.，Mutat Res.，356(2)，1996，217-224)和酵母菌中三乙撑三聚氰酰胺诱导的重组(Fahrig，R.，Mutat Res.，372(1)，1996，133-139)。在EP 0 806 956 B1中描述了用5-取代核苷治疗小鼠白血病细胞，抑制了阿霉素(亚德里亚霉素)诱导的Mdr1基因扩增和化疗耐性。

迄今为止所进行的体外试验中，5-取代核苷(即碱基类似物)总是与一种或多种细胞生长抑制剂一起应用。

从本文所述的现有技术出发，本发明的目的是防止由耐药性形成所致的细胞凋亡作用下降或至少延迟这种下降，从而提供相对于现有技术的已知疗法改进的治疗方法。

该目的通过权利要求1所述的用途实现。其他从属权利要求说明了有利的方案。

根据本发明，提供了DNA修复基因和/或癌基因的至少一种超表达抑制剂用于生产提高化疗后细胞生长抑制剂的凋亡作用的药物的用途。

值得注意的是，上述所有的DNA修复基因UBE2N和/或APEX、DDX1、STAT3和/或JUN-D都是癌基因。

优选的是，将5-取代核苷、其受保护形式、盐或前药用作超表达抑制剂。

优选的是，在化疗中联合使用至少一种细胞生长抑制剂和DNA修复基因和/或癌基因的至少一种超表达抑制剂或包含超表达抑制剂的药物。

对于5-取代核苷，使用(E)-5-(2-溴乙烯基)-2’-脱氧尿苷(BVDU)，可以使用其受保护形式、其盐和/或前药。根据本发明的BVDU前药的实例由以下通式I表示：

优选的是，5-取代核苷的所用剂量应使其血液浓度为0.02-50μg/ml。

令人惊奇的是，能够证明：在化疗完成之后，如果细胞进一步单独用5-取代核苷(碱基类似物)治疗，其生长受抑制程度会比用细胞生长抑制剂继续化疗更高。完全出乎预料的是，5-取代核苷(碱基类似物)的效果上升而非下降。

根据本发明利用筛选体系确定了该效果。该筛选方法为基于在优选8-30天的化疗周期期间用剂量逐渐增加的细胞生长抑制剂和恒定剂量的超表达抑制剂治疗肿瘤细胞。在该组合处理之后，中断细胞生长抑制剂，仅使用超表达抑制剂治疗。该恢复期(亦称恢复阶段)优选持续3-10天。这类化疗周期可连续进行至多6次。

结果，产生了令本领域技术人员惊奇的治疗方式的格局。

-单独给予5-取代核苷显示无效。

-5-取代核苷与细胞生长抑制剂共同施用有效。