[发明专利]用表面等离子共振技术检测人血清肿瘤标志物的方法以及其中使用的芯片

权利要求书

1.一种用于检测人血清肿瘤标志物的SPR生物传感器芯片，该芯 片基质为玻璃片，玻璃片表面镀有金属膜，金属膜表面经化学修饰形成 巯基烃类单分子层，并且巯基烃类的末端官能团与葡聚糖相连。

2.权利要求1的SPR生物传感器芯片，其中所述金属膜由选自铜、 银、铝和金的金属构成，优选为金。

3.权利要求1或2的SPR生物传感器芯片，其中巯基烃类选自分 子式为HS(CH₂)_mR和HS(CH₂)_nR’的混合巯基烃类、分子式为 R(CH₂)_mS-S(CH₂)_nR，的不对称双烃基二硫化物和分子式为 R(CH₂)_mS(CH₂)_nR，的不对称双烃基硫化物，其中n和m代表亚甲基单位 的数目，其为8-16的整数，R和R’代表烃链的末端，其为-CH₃、-OH、 -COOH或NH₂。

4.权利要求3的SPR生物传感器芯片，其中巯基烃类为巯基十一 醇和巯基十六醇的混合巯基烃类、(CH₂)₁₁OH-S-S-(CH₂)₁₆OH或 (CH₂)₁₁OH-S-(CH₂)₁₆COOH。

5.制备权利要求2所述的SPR生物传感芯片的方法，包括：

i.使用适当浓度的环氧氯丙烷与SAM反应生成环氧化合物；

ii.用葡聚糖溶液与固定了环氧氯丙烷的传感芯片表面反应形成 葡聚糖修饰的表面；

iii.将前述修饰的芯片浸入适当浓度的溴乙酸溶液中反应使葡聚 糖表面羧甲基化；

iv.把NHS和EDC的混合水溶液注射到葡聚糖修饰的传感芯片上 进行表面活化；

v.在测试通道注入肿瘤标志物捕获物质，阴性对照通道注入阴性 对照，联接配体，

vi.封闭活性位点。

6.一种使用表面等离子共振技术检测人血清肿瘤标志物的方法， 包括步骤：

(1)用反应缓冲液处理血清样品；

(2)使反应缓冲液处理的血清样品流过包被肿瘤标志物单抗或配 体的权利要求1的SPR生物传感器芯片表面，当生物大分子间发生特异 性结合时可以引起传感器芯片表面折射率的改变；

(3)用SPR测定混合物流过芯片之前和之后相应流池的信号差值； 和(4)根据上述信号差值，利用参考标准品绘制标准曲线而对血清肿瘤 标志物进行定量检测。

7.权利要求6所述的方法，其中所述反应缓冲液含有但不限于： 1％-10％小牛血清或牛血清白蛋白溶液，0.1-10mg/ml羧甲基葡聚糖溶 液和含有1-10ug/ml胶体金标记的单克隆抗体。

8.权利要求6所述的方法，其中在将所述的血清样品和反应缓冲 液用于SPR仪器反应时，采用静止或流动反应，流动反应时样品流速为 5-50ul/min。

9.权利要求6所述的方法，所述步骤在温度为25℃的条件下进行。

10.权利要求6所述的方法，其中所述的用反应缓冲液处理血清样 品是指抽取人静脉血，室温以1200转速离心10分钟，取上清液，用反应 缓冲液将血清配制成上样液注入芯片进行检测。

11.权利要求6所述的方法，该方法用于同时检测多种血清肿瘤标 志物，包括以下步骤：

(i)提供SPR系统，包括根据权利要求1-4所述的SPR生物传感 器芯片，其包被有肿瘤标志物单抗和阴性对照蛋白；

(ii)提供一系列不同浓度的参考标准品，在与待测物质相同的 条件下用(i)的系统制作标准曲线；

(iii)在SPR系统进样品之前记录一个SPR基线值，反应结束之 后再记录一个SPR响应值，以反应前后的差值为待测血清肿瘤标志物的 信号值；

(iv)根据标准曲线，得到每一反应信号值对应的浓度值。