[发明专利]诊断致瘤力以及确定对抗癌疗法的抗性

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请号为02815804.0 (PCT/US02/18549)，申请日为2002年6月14日，发明名称为“诊断 致瘤力以及确定对抗癌疗法的抗性”。

本发明是2001年6月15日申请的美国申请第09/880,842号的 继续申请，美国申请第09/880,842号是1999年12月8日申请的美 国申请第09/456,886号的部分继续申请，美国申请第09/456,886号 是1997年12月16日申请的美国申请第08/991,862号的一个分案， 08/991,862号申请是1997年5月23日申请、目前已放弃的美国申请 第08/863,079的部分继续申请。

发明背景

多细胞生物中细胞的增殖和分化受到高度受控过程的支配。癌 症细胞的一个显著特点是对该过程缺乏控制；增殖和分化失去控制， 导致不受控制的生长。已经进行大量努力，以更好地理解正常细胞和 肿瘤细胞之间的这种差异。研究焦点的一个领域是生长因子，更具 体地说，是自分泌生长因子刺激。

生长因子是携带涉及生长、分化、迁移和基因表达的信息到细 胞去的多肽。一般地说，生长因子在一个细胞内产生，作用于另一 个细胞，刺激增殖。然而，培养物中的某些恶性细胞表现对自分泌 生长机制更大或完全的依赖性。遵循该自分泌行为的恶性细胞避开 其它细胞生长因子产生的调节，因此它们的生长不受调节。

对自分泌生长控制的研究促进对细胞生长机制的理解，并导致 肿瘤诊断和治疗中的重要进步。为此，已经研究多种生长因子，包 括胰岛素样生长因子(“IGF1”和“IGF2”)、胃泌素释放肽(“GRP”)、 转化生长因子α和β(“TGF-a”和“TGF-b”)以及表皮生长因子(“EGF”)。

本发明涉及一种最近发现的生长因子。该生长因子首先在高度 致瘤的“PC细胞”的培养基中发现，“PC细胞”是从来自畸胎瘤的 脂肪生成细胞系1246分离的依赖于胰岛素的变体。该生长因子在本 文中称为“GP88”。已经纯化和在结构上特征鉴定GP88。GP88的 氨基酸测序指出：GP88与小鼠颗粒体蛋白/上皮素前体有氨基酸序列 相似性。

颗粒体蛋白/上皮素(“grn/epi”)是6kDa多肽，属于新型的富含 双半胱氨酸多肽家族。美国专利第5,416,192号(Shoyab等)涉及6kDa 上皮素，尤其是上皮素1和上皮素2。根据Shoyab，这两种上皮素 都由一种通用的63.5kDa前体编码，该前体合成后立即被加工成为 更小的形式，以致于在生物样品中仅有的天然产物是所述6kDa形 式。Shoyab等教导说该上皮素前体在生物学上没有活性。

与Shoyab等的教导相反，本发明发明人的实验室已经证明：该 前体并不总是在其合成后立即受到加工。由本发明发明人部分进行 的研究已经证明：该前体(即GP88)事实上作为携带20kDaN-连接糖 类部分的88kDa糖蛋白分泌。对GP88的N末端序列分析指出：GP88 开始于所述grn/epi前体的氨基酸17，这证明从前体cDNA推导出的 蛋白序列的前17个氨基酸对应于信号肽，所述信号肽用于靶向膜定 位或靶向分泌。与Shoyab等的教导相反，GP88在生物学上是有活 性的，有生长促进活性，尤其是作为生产细胞的自分泌生长因子。

乳腺癌是世界范围内妇女发病或死亡的主要病因。已知雌激素 是雌激素受体阳性(ER+)人乳腺癌细胞在体内和体外生长的主要刺 激物。虽然雌激素最初是乳腺癌建立和增殖所需的，但乳腺癌病程 中依赖于雌激素的肿瘤发展指示较差的预后。已经假设乳腺癌细胞 中雌激素的促有丝分裂效应至少部分由自分泌生长因子介导，所述 自分泌生长因子包括由雌激素调节的生长因子。因此，鉴定和特征 鉴定雌激素反应性基因(尤其是编码生长因子的基因)有助于理解乳 腺癌细胞中雌激素的效应。