[发明专利]一种从鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，属于从鹿茸提取活性物质的技术领域。

背景技术

鹿茸为梅花鹿或马鹿的尚未骨化的幼角，现代药物化学分析表明，其中存在多种生长因子，其中胰岛素样生长因子(IGF-1)有突出的药理作用。

胰岛素样生长因子(IGF-1)是一类促进细胞生长、具有胰岛素样代谢效应的因子，对机体生长和发育起着重要的调节作用，临床上可以用于治疗糖尿病、骨质疏松、周围神经病变、肌肉萎缩性侧索性神经炎等。

传统的鹿茸加工过程中，鹿茸要经过多次煮炸、烘干等步骤，高温使得其中的胰岛素样生长因子(IGF-1)等活性多肽失去活性从而丧失药效。为了保证活性不丧失，并且高效率提取和纯化胰岛素样生长因子(IGF-1)，现有技术报道了如下方法：

中国专利200410053399.6，报道了一种从鲜鹿茸中提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥等步骤。由于采用的提取溶剂为去离子水，对胰岛素样生长因子(IGF-1)的提取率很低，不适合工业化生产。

中国专利申请200510015619.0，报道了一种利用pH9～12的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、碳酸氢钠-氢氧化钠缓冲液或稀氨水与稀酸配制而成的碱性溶液为提取剂，通过超声波强化浸提、超滤浓缩、去脂、酸解、离子交换层析、第二次超滤和冷冻干燥等步骤提取鲜鹿茸中的IGF-1等活性多肽的方法。据报道，提取一步中IGF-1的提取率可以达到3200～3500ngIGF-1/g鲜鹿茸，而采用去离子水作提取剂，在相同工艺条件下IGF-1的提取率仅为1000ngIGF-1/g鲜鹿茸以下。相比较而言，该方法提取率有了很大提高，但是依然有待进一步提高。此外提取液还需经过去脂、酸解、离子交换层析、第二次超滤和冷冻干燥等繁琐生物步骤才能得到最终的冻干粉，所得到的冻干粉中IGF-1的含量只达到400-1000ppm。

中国专利申请200510015620.3，公开了一种综合提取鲜鹿茸中活性成分的方法，首先利用超临界CO₂萃取鲜鹿茸中脂溶性成分，萃取条件是：萃取温度25～35℃，萃取压力20～60MPa，CO₂流速10～25kg/h；然后采用超声波强化浸提、超滤浓缩和冷冻干燥技术提取超临界CO₂萃余物中的胰岛素样生长因子IGF-1等活性多肽。该方法采用超临界CO₂萃取技术，为提取IGF-1等活性多肽进行了脱脂预处理，但是提取IGF-1时依旧采用和中国专利申请200510015619.0相同的pH9～12的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液进行提取，离心分离后的提取率依然保持3200～3500ng IGF-1/g鲜鹿茸的水平。此外，提取后的提取液，只是直接进行了简单的后处理，即超滤浓缩、冻干，没有经过离子交换层析柱，得到的冻干粉中IGF-1的含量显然低于中国专利申请200510015619.0的400-1000ppm。

现有技术中已报道的方法，提取率还可以再提高，且纯度不高，仅可作为化妆品和保健品的原料，不能满足药用的要求(纯度大于98％)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的新方法，可以克服现有技术的不足，提供更高的提取率，并且最终产物冻干粉具有更高的纯度。

本发明的方法包含如下步骤：

1、粉碎：取鲜鹿茸，在低温下粉碎，温度4-10℃，过80目筛。

2、超声波提取：将粉碎后的鹿茸用3-10倍(体积/重量)的pH9-12(优选pH10)的缓冲液进行提取，优选5-9倍，最优选7倍；温度4-30℃，(优选10-25℃，最优选20℃)；时间10-60min，优选15-30min，最优选15-20min；提取1-2次。

3、高速离心分离：提取液于高速离心机中5000-10000转离心20min，沉淀部分加入2-5倍的缓冲液，重复上述操作，合并两次离心所得上清液。

4、超滤：将上清液用膜进行超滤，去除小分子物质和大分子物质，并对上清液进行浓缩，得浓缩液，膜的截留值为1-100kDa，优选6-20kDa。