[发明专利]CA15－3、CEA、CA19－9、CA12－5、SF乳腺癌胶体金五联检诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断肿瘤的试剂盒，尤其涉及一种乳腺癌胶体金五联检诊断试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法以及该试剂盒在诊断乳腺癌中的应用，属于生物医学领域。

背景技术

乳腺癌是世界上最常见的上皮细胞肿瘤，对人类的健康和生存构成重大威胁，是世界各国面临的最重要的社会问题之一。时至今日，乳腺癌占全身恶性肿瘤的7％-10％，其发病率逐年上升，自1980年以来每年以3％的速度增长。特别是北美、西欧等发达国家，尤为明显。全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌。2006美国癌症协会；国际癌症学会；国际乳腺癌联合体有关乳腺癌的统计资料显示：

在女性人口中，8位中就有1位将遭受乳腺癌的威胁。平均每2分半钟即有1位女性被诊断为乳腺癌患者。在2006年，平均每13分钟就有1位女性死于乳腺癌。仅在2006年，有212,920位女性受到乳腺癌的侵袭，大约有40,970位患者将面临死亡。

在目前乳癌发病机理不清楚的情况下，最好办法就是早期发现、早期诊断与早期治疗，这是提高乳腺癌疗效的关键。

肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。多数乳腺癌患者血清中都会出现针对某些肿瘤标志物的抗体，且与疾病的相关性已得到认可，所以肿瘤标志物检查对乳腺癌的诊断和疗效评价方面都具有重要的意义。乳腺癌血清学诊断中肿瘤标志物通常涉及以下三类的检查：

(1)癌胚抗原(CEA)：一种分子量为22KD的多醣蛋白复合物，罹患由内胚层细胞分化而来的其它恶性肿瘤时，CEA会呈阳性反应。CEA是监测病人病情发展的标志物，可对病人外科手术前进行CEA检测有助于评价病人的病理状况和确定。但是其为非特异性抗原，在许多肿瘤及非肿瘤疾病中都有升高，无鉴别诊断价值，可手术的乳腺癌术前检查约20％～30％血中CEA含量升高，而晚期及转移性癌中则有50％～70％出现CEA高值。

(2)血清铁蛋白(SF)：血清铁蛋白反映体内铁的储存状态，血清中含量很微，其量的多少是判断体内缺铁还是铁负荷过量的指标。在很多恶性肿瘤如白血病、胰腺癌、胃肠道肿瘤、乳腺癌中有铁蛋白的升高。但其他非恶性肿瘤患者如经常大量饮酒引起肝脏损害、脂肪肝、慢性肝病、原发性含铁血黄素沉积症、重型地中海贫血、铁负荷过多和肾透析等都可以引起血清铁蛋白浓度增高，所以血清铁蛋白测定是恶性肿瘤的一项非特异性诊断指标。

(3)糖类抗原：常用于乳腺癌诊断的如：CA15-3、CA19-9、CA12-5等。糖类抗原15-3(CA15-3)的水平和病人的临床状态以及肿瘤治疗的应答有关，可用于乳腺癌病人治疗过程中病情的进程和消退的监测，但对乳腺癌诊断符合率只能达到为33.3％～57％。糖类抗原12-5(CA12-5)可区别诊断绝经后妇女的初发和恶性肿块、决定原发性癌症的治疗和预测，并对于有乳腺癌和卵巢癌家族史人群的检测很有帮助。但是用CA12-5进行筛查的主要问题是对于早期疾病缺乏灵敏度(仅有50％的I期病人CA12-5升高)和特异性。并且CA12-5不是卵巢癌的特异性标志物，输卵管腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胰腺癌、肠癌、乳腺癌和肺癌患者CA12-5的水平也会升高。糖类抗原19-9(CA19-9)主要被用来作为筛检乳腺癌、胰脏癌、胆囊癌、结肠癌和胃癌的相关抗原。正常人体组织中含量甚微。

然而单独检测上述某一肿瘤标志物指标，并不能提供更多的信息，检测灵敏度和特异性都比较低，很难检测出早期或复发乳腺癌患者，容易出现误诊或漏诊。如同时使用CA15-3、CEA、CA19-9、CA12-5及SF联合诊断乳腺癌即可提高临床检测的灵敏度及特异性。

免疫层析法(Immunochromatography)是九十年代在美国兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，临床上应用的产品主要采用双抗体夹心的设计，此技术与以往的任何一项检测技术相比的突出优点，快速(全部检测过程仅需3-20分钟)、准确、简便、价格低廉、人为操作误差小、稳定性好等特点外，由于该层析法为通过硝酸纤维素膜进行横向流动，允许并联多个试剂条进行多项指标联合检测，从而达到联检的目的。

发明内容

本发明目的在于应用免疫层析法研制出一种可靠的临床联合检测诊断试剂，其主要检测CA15-3、CEA、CA19-9、CA12-5、SF五种肿瘤标志物，从而大大提高乳腺癌检测的速度和效率，相对于单检试剂具有灵敏度高及特异性强等特点。同时，每种肿瘤标志物的显色颜色不同，结果判断更加直观。