[发明专利]一种利用反胶团法分离纯化鱼精蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用反胶团法分离纯化鱼精蛋白的方法，从利用鱼白制得的鱼精蛋白粗提液中萃取纯化鱼精蛋白，其特征是包括如下步骤：

(1)制备鲤鱼鱼精蛋白粗提液：称取100g解冻后的鲤鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入200ml浓度为0.14M的NaCl溶液，匀浆1min后，用纱布过滤得浆液，然后在8000r/min下离心分离10min，弃上清液，得沉淀即鱼精蛋白与DNA的复合物DNP，每克DNP加入4ml的7.5％的硫酸，搅拌，混合均匀，8000r/min离心10min，弃沉淀，上清液即为鲤鱼鱼精蛋白粗提液；

(2)配制反胶团溶液：分别称取4.44g二(2-乙基己基)琥珀酸酯磺酸钠和195.56g辛烷后，将其混合均匀，静置，直到完全溶解，得200g反胶团溶液；

(3)前萃取过程：调节鲤鱼鱼精蛋白粗提液的pH＝7；以2M氯化钠调节鲤鱼鱼精蛋白粗提液的离子强度到0.1M；鲤鱼鱼精蛋白粗提液和反胶团溶液以重量份比1∶1加入到三角瓶中，两相在摇床上以240rpm的速度振荡8min，温度控制在20℃，将混合液以4000rpm的速度离心5min，获得清晰分相；

(4)配制反萃水溶液：反萃水溶液包括异丙醇、氯化钾、和水，按其重量份配比为异丙醇、氯化钾和水＝15∶5∶80比例分别称取异丙醇、氯化钾、和水，其中异丙醇30g、氯化钾10g和水160g，将其混合均匀，静置，直到完全溶解，用NaOH调pH＝11得200g反萃水溶液；

(5)反萃取过程：负载鱼精蛋白的反胶团溶液同反萃水溶液等体积混合，在摇床上35℃以240rpm的速度振荡10min，然后将混合液中以4000rpm的速度离心5min，获得分相，取下层液体为纯化后的鱼精蛋白溶液。