[发明专利]利用高速逆流色谱法纯化一枝蒿酮酸和金腰素乙的方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用高速逆流色谱法，从含酮酸和金腰素乙的天然植物中分离和制备高纯度酮酸和金腰素乙的方法。 

背景技术

近20年来发展起来的高速逆流色谱技术(High-speedcounter-current chromatography，HSCCC)是一种没有固态支撑体的液-液分配色谱技术，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作为分离柱，固定相和流动相都是液态，螺旋管自转的同时，绕一平行于自转轴的外部轴线做公转运动，借以获得足够强的离心力场，在两相中的一相得以保留的前提下，形成固定相与流动相的两相分割趋势和对流趋势，这种分割和对流的过程是连续进行的，如果把要分离的样品从螺旋管柱的入口注入，连续的分配传递过程就会在管柱里进行，从而实现连续的、高效的液-液分配过程。HSCCC分离效率高；操作简单，样品不需严格的预处理；可从极复杂的粗制样品中一步分离得到高纯度的组分；分析/分离粘度较高和易被固定相吸附的样品方面具有明显优势；可以分析/分离黄酮、生物碱、醌类、类脂等小分子化合物，也可分析/分离多肽、多糖、蛋白质等高分子化合物，适用范围比较广泛；能够明确表达中药材这种复杂体系中不同批次间的差异，稳定性和重现性好；其仪器及耗材完全国产化，成本明显低于高效液相色谱。随着天然药物的蓬勃发展HSCCC的主要研究领域集中于天然药物的分离纯化，已从几十种天然原料中分离得到数百种高纯度的单体化合物。非常适合于维药化学对照品的制备。 

维药历史悠久，在其形成和发展的过程中，采阿拉伯、古希腊等 民族医药之所长，并受到中医药学的影响，是我国民族医药的独立分支，历史上为西域各族人民的繁衍和昌盛做出过重要贡献。新疆自治区有维药600余种，较常用的360种左右，其中本地产资源约160种，占维药总数的27％。已收入《中华人民共和国》药典的药品有202种，其中药材115种，成方制剂87种，属于民族专用的约有30种，毛菊苣和一枝蒿是非常有代表性的药材。 

维药有着独特的治病理念，是中国民族药的重要组成部分，但其应用基本局限在新疆自治区的范围内，在全国范围及世界各地的推广速度缓慢。导致这种情况的主要原因：一是生产工艺离现代医药工业优质化生产要求还有很大差距；二是原药材的主要活性成分是次生代谢物，对后天的生长环境依赖性很强，原料药来自天然，又多为人工分散采收、加工，受天气、地域差别及人为因素影响很大，原料、中间体及最终产品离规范化、标准化管理还有很大差距，缺乏严格的质量监控标准和良好的监控方法，很难保证产品质量的稳定性；三是维药产品的疗效缺乏采用现代药物临床研究常用的“随机分组”、“对照”、“双盲”、“多点观察”等科学实验方法获得的科学数据说明，难为现代医学工作者和管理机构所信服。维药现代化是维药产业可持续发展的根本出路。维药原料和成药(片剂、颗粒剂、口服液、注射剂)的质量监控是维药现代化进程中迫切需要解决的关键问题之一。而标准对照品是质量监控的重要物质基础，可供原药材种植基地监控气候、地域、采收期及人为因素等对药材质量的影响，指导种植；可供成药生产厂家指导药材的合理勾兑，控制中间体及最终产品的质量，建立相关企业标准；为指纹图谱中重要指标成分的标定及谱效关系建立提供基础。 

而无论是维药还是中药的研究与开发，都严重缺乏高纯度的标准对照品，这是制约标准制订与实施的关键因素之一。目前国家质量技术监督局正在建立各种国家实物标准，天然药物的标准品是其中的重 要内容。 

新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)系菊科植物，产于新疆维吾尔自治区境内的天山及阿尔泰山山脉，是新疆民族药常用药材，具有解毒、抗过敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效。临床用于肝炎、感冒、咽炎、扁桃体炎、眼炎的治疗。一枝蒿中含有黄酮类、半倍萜类、氨基酸类、甙类、多糖类、挥发油、多肽、生物碱等化合物。 

本发明针对化学对照品严重缺乏的问题，在已有的维药药效学研究基础上，采用近年来发展迅速的高速逆流色谱技术，同时制备一枝蒿酮酸和金腰素乙等两种代表性化学成分的方法，并采用该方法获得了高纯度(纯度95％上)的一枝蒿酮酸和金腰素乙的单体化合物；并建立以高速逆流色谱为核心技术的标准对照品制备平台，为维药化合物库的建立及国家实物标准的申请打下基础。 

发明内容