[发明专利]罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊及其制备方法。

背景技术

罗伊氏乳杆菌(拉丁名：Lactobacillus reuteri)是一种栖息于人和动物的肠道中，具肠道表皮粘附能力的有益乳酸菌。研究表明罗伊氏乳杆菌代谢产生的罗伊氏乳素、蛋白、有机酸等物质，能广泛的抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等的生长，具有广谱抗菌作用。罗伊氏乳杆菌能够作为饲料添加剂，改善动物肠道菌群分布，抑制有害菌的繁殖，从而避免动物出现一些肠道类的疾病。罗伊氏乳杆菌益生制剂也可用于改善机体衰老、肠道疾病、抗生素滥用、环境污染等引起的人肠道内有益菌数量下降的问题，促进肠道有益菌的增殖，从而促进人体健康。我国卫生部也于2003年批准罗伊氏乳杆菌作为保健食品益生菌种。

益生菌制品主要是活菌制剂，目前已有罗伊氏乳杆菌益生菌制剂出现，为保证有效期内的活菌数，一般采用2-8℃的低温保存，给储存、运输和销售带来极大的不便。罗伊氏乳杆菌是一种专性厌氧菌，极易受到氧气、温度、酸碱等环境因素的影响，因此液体菌剂难以长期保持其高活性。益生菌要对人体产生有益作用，首先它必须通过食道、胃环境到达肠道末端并定殖于肠黏膜上，但口服的罗伊氏乳杆菌液体制剂，在通过人和动物的胃的时候，胃中的酸性环境(pH为2左右)和胆汁会杀死罗伊氏乳杆菌，使活菌数急剧降低，造成罗伊氏乳杆菌不能在肠道中大量定殖，从而影响罗伊氏乳杆菌的调节肠道菌群的治疗保健作用。据报道，口服的冻干菌剂，在胃中的存活率仅为百万分之一左右，存活率极低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供了一种罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊及其制备方法，具有能保护其中的活性物质、酶和益生菌，以抵抗外界环境的影响，延长益生菌在室温条件下的存活时间和避免口服时受到胃酸的杀灭，使其安全到达肠道，定向释放发挥疗效的特点。

为达到上述的目的，本发明采用如下技术方案，

一种罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊，每48000-52000颗中空微胶囊由以下重量份的组分制成：

罗伊氏乳杆菌种子提取液  1000ml；

淀粉  5-20g；

羧甲基纤维素  5-20g；

纤维素硫酸钠  2-5g；

氯化钙  5-20g。

所述的罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊，每48000-52000颗中空微胶囊优选由以下重量份的组分制成：

罗伊氏乳杆菌种子提取液  1000ml；

淀粉  12g；

羧甲基纤维素  12g；

纤维素硫酸钠  3g；

氯化钙  12g。

一种罗伊氏乳杆菌益生中空微胶囊的制备方法，包括如下步骤：

(1)罗伊氏乳杆菌的分离、纯化：包括菌种分离培养基的制备以及菌种的分离筛选；

菌种分离培养基

牛肉蛋白粉10g，鱼肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，葡萄糖10g，阿拉伯糖5g，蔗糖5g，醋酸钠5g，柠檬酸二铵2g，吐温80 0.1g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.28g，琼脂18g，蒸馏水1000ml。用醋酸调节pH至5.0。

菌种的分离筛选

将上述培养基装入Hungate试管制备培养基滚管。取三个月婴儿排泄物将其分散在无菌水中，摇匀静止，取上清液，加入Hungate滚管，滚动使上清液均匀分布在滚管培养基表面。用5％-12％二氧化碳培养箱37℃下培养24-72小时后，出现白色菌落。加入无菌水使菌分散在水中，取出后，涂平板。对得到的革兰氏阳性和接触酶阴性细菌进一步进行耐酸、耐胆盐、耐高铜和抗大肠杆菌筛选。对筛选得到的菌株考察其转化甘油生成罗伊氏素的能力，可确定其为罗伊氏乳杆菌。

(2)罗伊氏乳杆菌种子培养：包括固体斜面培养基的制备，种子培养基的制备，然后将由步骤(1)分离筛选得到的菌株接种于固体斜面培养基，在37℃下培养24小时。然后将斜面上的菌株接种到液体种子培养基37℃下厌氧培养12小时，然后将种子培养液加入含2L发酵培养基的3L发酵罐中，在37℃下厌氧培养12小时。

固体斜面培养基

牛肉蛋白粉10g，鱼肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，葡萄糖20g，醋酸钠5g，柠檬酸二铵2g，吐温80 0.1g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.28g，琼脂18g，蒸馏水1000ml。用醋酸调节pH至5.4。

种子培养基