[发明专利]一种能快速检测外源蛋白表达的光合细菌表达体系及其应用

权利要求书

1.一种能快速检测外源蛋白表达的光合细菌表达体系，包含表达载体和目的蛋白的诱导 表达及分离纯化两部分，其特征在于表达载体含puc操纵子序列，该puc操纵子包括结构基 因pucB，pucA和pucC。

2.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述的puc操纵子获自类球红细菌。

3.根据权利要求1或2所述的表达体系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

1)目的蛋白基因的克隆；

2)步骤1)获得的目的蛋白基因与表达载体连接，获得含有目的蛋白基因的融合蛋白表 达载体；

3)步骤2)获得的融合蛋白表达载体通过大肠杆菌S17-1接合转移到类球红细菌突变株 DD13，构建成目的融合蛋白的工程菌；

4)目的融合蛋白工程菌的诱导表达；

5)光谱分析检测步骤4)所得的目的融合蛋白的表达情况；

6)目的融合蛋白的提取和分离纯化。

4.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤2)中所述的表达载体包括pRK-CH或pRK-AH；

5.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤2)所述的表达载体pRK-AH的序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

6.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤3)中所述的类球红细菌突变株DD13为缺失LH2、LH1和RC基因的菌株。

7.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤4)所述的诱导表达方法为：黑暗和半好氧条件下，添加IPTG至终浓度1mM；

8.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤5)所述的光谱分析方法为：采用紫外/可见分光光度计直接在700nm-880nm波段扫描分 析步骤4)所述诱导表达后的工程菌发酵液；

9.根据权利要求3所述的能快速检测外源蛋白表达的表达体系的构建方法，其特征在于 步骤6)所述的目的融合蛋白的提取和分离纯化方法为：步骤4)所得工程菌发酵液经离心收 集菌体，并用机械破碎法破碎细胞，然后采用高速和超高速离心法将破碎细胞的可溶性蛋白 和膜蛋白分离开，用LDAO去垢剂处理总膜蛋白，最后采用组氨酸亲和层析法分离纯化目的 融合蛋白；

10.权利要求1或2所述的表达体系在蛋白质或多肽的表达中的应用。