[发明专利]一种胸腺五肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域中多肽的合成方法，具体说是一种胸腺五肽液相合成制备方法。可适用于大规模。

背景技术

胸腺五肽，英文名Thymopoietin pentapeptide；TP-5；Thymopentin，结构式为Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，分子式及分子量：C₃₀H₄₉N₉O₉，679.77。

胸腺五肽通过促进或抑制的双向调节作用使免疫能力趋于正常，是一种很有发展前景的免疫功能调节药物。而且迄今为止的实验药理学研究和临床药理学研究以及临床应用均未发现胸腺五肽有任何毒副作用。胸腺五肽于1985年在意大利上市，商品名为：Timunox。传统的胸腺五肽合成均由固相合成法完成，成本高，难于规模化生产，产物纯化难度很大，有时甚至用高压液相色谱法也难于达到所希望的纯度。

发明内容

本发明提供了一种采用混合酸酐法合成胸腺五肽Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH的方法。

所述方法过程有二肽合成-三肽合成-四肽合成-五肽合成-粗品生成；它是以N-甲基吗啉为催化剂，采用氯甲酸烷基酯为活化剂，活化被保护的氨基酸形成高反应活性的混合酸酐，与氨基端裸露的氨基酸或肽反应来合成胸腺五肽；各肽合成中均采用N-甲基吗啉为催化剂，氯甲酸烷基酯为活化剂，氯甲酸烷基酯(ClCO₂R₁，R₁＝Et、¹Bu)选用氯甲酸乙酯、氯甲酸异丁酯。各肽合成过程包括混合酸酐的生成-过滤-减压浓缩-酸碱洗涤-干燥除水-各肽生成-脱保护基的过程，合成五肽后，脱掉保护基团，生成粗品胸腺五肽，再纯化；所述被保护的氨基酸按各肽合成顺序是酪氨酸苄酯与缬氨酸的混合酸酐反应得到二肽、天门冬氨酸的混合酸酐与二肽反应得到三肽、赖氨酸的混合酸酐与三肽反应得到四肽、精氨酸的混合酸酐与四肽反应得到五肽粗品，所用氨基酸的2-氨基采用芴甲氧羰基(Fmoc)保护，精氨酸的2-氨基由叔丁氧羰基(Boc)保护，天门冬氨酸的侧链羧基采用叔丁酯基保护，赖氨酸的侧链氨基用叔丁氧羰基基保护，精氨酸的侧链胍基HCl保护，酪氨酸的酚羟基用苄基保护，羧基用酯基保护；酪氨酸酯为酪氨酸苄酯。混合酸酐的生成过程中的反应温度为-20～-15℃；各肽合成过程中的反应温度为-10～0℃。酸洗涤-干燥除水，分别用稀盐酸和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥；脱保护基过程为，加入哌啶脱除芴甲氧羰基(Fmoc)保护基团，减压浓缩后，用醚洗；加入有机溶剂溶解，有机溶剂可以是二氯甲烷、氯仿，在用二氯甲烷或氯仿溶解并冷藏备用，其中溶剂优选二氯甲烷；所述粗品生成是指合成五肽后，用三氟乙酸-巯基茴香醚系统脱除所有保护基团。

在粗品生成后的纯化过程为，用制备性高压液相色谱纯化，得到纯度大于99％的胸腺五肽水溶液，然后用冷冻干燥机冷冻干燥得到白色冻干粉状物固体，纯度可以达到99％以上。所用的各种保护氨基酸均能很容易从厂家购得。

本发明与现有技术相比有如下优点：

1产成本相对较低，以固相合成胸腺五肽为例，其实际产率仅为理论产率的50％，而本发明的产率大于理论产率的60％；

2在整个的生产工艺中所用的试剂价格相对较低；

3在整个的生产过程中所主要采用的是通用设备，而不象现有技术中需依赖大型设备，因此生产费用较低；

4生产工艺较为简单，反应过程易于控制，生产工艺的可重复性强；

5综合生产周期较短，进一步减小生产成本，提高生产效率；

6合成规模可大幅度提高，容易实现工业化的大规模生产。

具体实施方式

以下通过实施例、实验例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限制。

实施例1二肽化合物Val-Try(Bzl)Obzl·HCl的合成