[发明专利]抗人SCGN的单克隆抗体及其制备与应用以及杂交瘤细胞株

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种抗人促泌素(secretagogin，简称SCGN)的单克隆抗体及其制备与应用，以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

(二)背景技术

恶性肿瘤是严重危害我国人民群众身体健康的最常见疾病之一，每年约有130万人死于恶性肿瘤，是我国第二大死因。由于对肿瘤发生、发展认识的局限性，目前临床上理想的肿瘤标志物仍很少。促泌素是我们运用双向凝胶电泳的方法首次筛选到的一个在结直肠癌中表达下调的蛋白，并经免疫印迹及免疫组织化学反馈性验证。促泌素是2000年由Wagner等利用免疫筛选技术从人胰腺β细胞cDNA文库中筛选出来的一个新的基因，该基因定位于染色体6p22.1-22.3，其转录产物经翻译后形成一种含276个氨基酸，分子量为32KDa的蛋白质。对该蛋白的氨基酸序列分析发现，该蛋白含有6个EF-手型Ca²⁺结合环，属S100家族蛋白。人体内促泌素基因在胰腺及垂体中表达最高，在其他组织中也有表达，如脑、肾上腺、甲状腺及胃肠道等。目前该蛋白的性质和功能还不是十分清楚。有研究表明促泌素蛋白有控制细胞生长和分化的作用。我们的免疫组织化学结果表明，促泌素主要表达于正常结直肠粘膜隐窝的基底层，细胞形态呈锥形，与肠道神经内分泌细胞极为相似，初步提示促泌素可能是一个新的神经内分泌的标记物。在此基础上，我们利用多克隆抗体以免疫组织化学的方法检测了54例神经内分泌肿瘤，并与CgA、NSE和Syn等三个常用的神经内分泌标记物比较，结果发现促泌素对神经内分泌肿瘤有很好的特异性，检测的敏感性要高于其它三个指标。尤其是对于小细胞肺癌，促泌素有很好的敏感性，在检测的31例小细胞肺癌中，有26例呈阳性表达，其中有17例呈弥漫性强阳性表达，敏感性要高于CgA、NSE和Syn三个标记物。以往的研究报道，尽管联合应用多种神经内分泌的标记物进行检测，但至少有10％的小细胞肺癌呈阴性。因此，促泌素有可能成为小细胞肺癌新的诊断标记物。

众所周知，随着工业化的进程加快和吸烟的增多，肺癌已成为目前人类因癌症死亡的主要原因，其发病率与病死率均呈逐年上升趋势。在我省，近20年来，肺癌病死率上升了148.38％，居恶性肿瘤死因之首。虽然治疗方法不断改进，但治疗效果仍未根本改观，主要是缺乏早期诊断和治疗的有效方法。尤其是小细胞肺癌，作为肺癌最基本类型之一，具有发病年龄较轻，恶性程度高，易转移、复发，预后差等特点。寻找与肺癌早期诊断、治疗和评估预后相关的肿瘤分子标记物已成为迫在眉睫的研究课题。而且，与其它类型肺癌不同，该类肺癌一般不主张手术，化疗是常规治疗手段。所以，气管镜或经皮肺穿刺活检获取病理诊断是治疗关键。然而，由于活检组织的数量、取材挤压等因素影响，诊断困难，常要借助免疫标记。但如前面提及，至少有10％的小细胞肺癌不表达现有各类神经内分泌标记，从而使诊断困难，甚至导致不必要的外科手术治疗。因此，一个敏感、特异的标记将是小细胞肺癌诊断的有力工具。

为此，我们在已有的工作基础上，制备抗人促泌素单克隆抗体并验证，建立灵敏、可靠的外周血检测方法，检测神经内分泌肿瘤，尤其是小细胞肺癌的外周血，以评估其对于诊断、预后及临床治疗效果检测等的应用价值。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种抗人促泌素的单克隆抗体及其制备与应用，以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明采用的技术方案是：

一种抗人促泌素的单克隆抗体，所述单克隆抗体对SEQ ID No.1所示核苷酸序列的第204～1034位核苷酸(即SEQ ID No.3所示核苷酸序列)编码的多肽具有特异性，所述单克隆抗体由保藏编号为CCTCC No：C200729的细胞株分泌产生。本发明关键在于免疫抗原的确定，选择SEQID No.1所示核苷酸序列的第204～1034位核苷酸编码的多肽作为抗原，在已知抗原前提下，抗体可通过本领域熟知的技术方便的获得。

所述单克隆抗体对SCGN重组蛋白(分子量为32KD)具有反应性，所述SCGN重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

所述单克隆抗体为IgG1亚型，命名为SCGN-F9。

一种产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日期2007年10月1日，保藏编号CCTCC No：C200729。所述杂交瘤细胞株由免疫的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞经融合、筛选、克隆、传代和反复冻存、复苏后获得的小鼠杂交瘤细胞系，能稳定分泌单克隆抗体SCGN-F9。