[发明专利]冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法，属于生物制品技术领域。

背景技术

甲肝疫苗是预防甲型肝炎的有效手段。目前国内外生产的甲肝疫苗(包括灭活疫苗 和减毒活疫苗)都是液体剂型，其基本特点是在保存和运输过程中必须依赖于冷链系统 以保证其质量。我国作为一个人口众多、经济不发达、地理环境复杂、交通不方便的发 展中国家，液体剂型的甲肝减毒活疫苗在保存和运输过程中难于处于严格的冷链环境 中，常因此而影响疫苗的质量。利用冷冻干燥技术将甲型肝炎减毒活疫苗制成冻干剂型， 能够更有效地保障疫苗的热稳定性和免疫原性。但当采用现有技术对疫苗进行冷冻干燥 时，由于甲型肝炎病毒对热较为敏感，在冻干过程中疫苗的活性损失很大，冻干后病毒 滴度很低。因此，有必要研究新的技术方案，以提高冻干后甲型肝炎减毒活疫苗的滴度， 并且保证它的热稳定性。

发明内容

本发明的第一个目的是提供了一种冻干甲型肝炎减毒活疫苗。

本发明的第二个目的在于提供一种冻干甲型肝炎减毒活疫苗的制备方法。

本发明的第一个目的通过下列技术方案实现：一种冻干甲型肝炎减毒活疫苗，由下 列体积比的原料组成：甲型肝炎减毒活疫苗∶冻干保护剂＝1∶0.5～1.5，其特征在于 所述冻干保护剂即海藻糖与甘氨酸的混合水溶液的组成为：海藻糖2～10克/100毫升， 甘氨酸3.2～16克/100毫升，溶剂为水，其中溶质甘氨酸与海藻糖的质量比即甘氨酸： 海藻糖≥1.6。

所述甲型肝炎减毒活疫苗为市购产品。

所述海藻糖、甘氨酸均为市购产品。

所述水为现有技术中常规的纯水或者注射用水或者双蒸水。

本发明的第二个目的通过下列技术方案实现：一种冻干甲型肝炎减毒活疫苗的制备 方法，其特征在于经过下列工艺步骤：

A、将甲型肝炎减毒活疫苗与冻干保护剂按1∶0.5～1.5的体积比进行混合，其中 冻干保护剂即海藻糖与甘氨酸的混合水溶液的组成为：海藻糖2～10克/100毫升，甘氨 酸3.2～16克/100毫升，溶剂为水，其中溶质甘氨酸与海藻糖的质量比即甘氨酸∶海藻 糖≥1.6；

B、将步骤A的混合物分装至西林瓶中，每瓶0.5ml，半加塞后放入冻干机腔体内， 以0.4~0.6℃/min的速度将温度降至-40±1℃，维持4~8小时；然后以0.8~1.2℃/min 的速度升温至-15±1℃；再以0.04~0.06mbar真空度抽真空8~12小时，同时维持隔板 温度-15±1℃；之后以1.4~1.6℃/min的速度升温至25±1℃，维持6~10小时，即得冻 干甲型肝炎减毒活疫苗。

本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：1)冻干后疫苗的滴度不变；2)热稳 定性好，通常在37℃放置7天时，液体疫苗的感染性滴度平均要下降0.8logCCID50/ml， 而本发明提供的冻干疫苗其感染性滴度则不变；3)冻干疫苗具有良好的安全性和免疫 原性，本发明配方成分明确，配方简单，制备方法简单易行，易于实施，疫苗制备工艺 步骤可操作性强，利于产品的标准化大规模生产。

本发明解决了下列技术难点：由于甲肝病毒对热敏感，在冻干过程中疫苗的活性损 失很大，冻干后感染性滴度很低。另经研究表明，甲型肝炎病毒在蔗糖基质中冻干后， 病毒的活性大大下降。因此选择冻干保护剂，这对冻干甲型肝炎减毒活疫苗起着至关重 要的作用。又经研究表明，在干燥时海藻糖起着保护细胞与生物大分子的作用，例如， 抗血清抗体在有海藻糖存在时，室温或37℃下空气干燥后，在室温贮存几年其生物活性 仍不会发生明显变化。海藻糖是由两个葡萄糖分子通过半缩醛羟基缩合而成，无毒无害， 化学性质非常稳定，在体内可被酶水解成葡萄糖而被利用。所以，本专利的发明人将海 藻糖应用于甲型肝炎减毒活疫苗的冻干保护剂中，经过多年的潜心研究与实验，并付出 了创造性的劳动，筛选到一组最佳的冻干保护剂，并将保护剂与甲型肝炎减毒活疫苗混 合后进行冷冻干燥，获得的冻干疫苗感染性滴度(l0gCCID50/ml)与冻干前比较无明显 差异(P>0.05)，具有较好的稳定性，冻干后疫苗的残余水份含量<3.0％，达到生物制品 规程要求，经小白鼠安全性试验合格，经临床研究证实该冻干甲型肝炎减毒活疫苗具有 良好的临床安全性和免疫原性。其结果如下：

1、实施例2提供的冻干甲型肝炎减毒活疫苗的水分含量(W/V％)见表1.