[发明专利]大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于聚合物科学与技术领域，特别涉及一种大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球及其制备方法。

背景技术

海藻酸钠是一种从褐藻中衍生出的阴离子多聚糖，它由D-manuronic and L-glucosidelinkages组成。海藻酸盐的重要特征是在二价金属离子的存在下会产生凝胶，如钙离子，锌离子等。海藻酸钠是一个可行且合适的蛋白质分子印迹基材，然而，海藻酸钙的机械强度不高，它的溶胀常常使印迹位点变形从而降低蛋白质分子的印迹效率。为此很多研究者尝试改性海藻酸钙或是将海藻酸盐与其它聚合物复合来提高应用性能。

张凤菊等报道了BSA印迹的海藻酸钙凝胶微球，羟乙基纤维素被用来与海藻酸钠(SA)形成互穿网络以增加微球的机械强度，在一定程度上提高了印迹效果。【成国祥，张凤菊，英晓光，双模板法羟乙基纤维素改性海藻酸盐微球及制备方法，中国发明专利，申请号200510015832.1】。将聚乙烯醇(PVA)与海藻酸钙复合的研究也有报道【S.Hertzberg。E.Moen。C.Vogelsang.Mixed photo-cross-linked polyvinyl alcohol and calcium-alginate gels for cellentrapment.Appl Microbiol Biotechnol。1995。43：10-17】。【Chao Liu，Xiujie Ji，Kongyin Zhao，et al.Preparation of Hydroxyapatite/Ca-Alginate Composite Microspheres via Inverse SuspensionCrosslinked Method.Journal of Applied Polymer Science，104(2007)2034-2038】也阐述了聚磷酸钙与海藻酸钙的复合。

PVP凝胶具有化学惰性和生物相容性，本身不会与蛋白质发生强的化学反应，也不使蛋白质变性，使其具有良好的应用前景，而用交联pvp软湿凝胶进行蛋白质印迹也被研究过【GX cheng，C W Li，Study on the preparation of BSA-imprinted crosslinked PVP microsphers and therebinding property via suspension polymerization，prepared】。

而本发明是将海藻酸钙与PVP两种成分复合，从而为大分子印迹提供一种新的基材。

发明内容

本发明提供了大分子蛋白质印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球的制备方法及印迹方法。

本发明的大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球，其组分和重量百分比如下：

海藻酸钠             10％-50％

聚乙烯基吡咯烷酮     0.1％-16％

氯化钙        20％-70％

蛋白质        0.1％-15％。

所述的蛋白    质包括牛血清白蛋白，卵白蛋白或溶菌酶。

所述的聚合物微球是蛋白质包埋印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球粒径大小为100-600μm.。

本发明的大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球的制备方法，其特征是所述的蛋白质包埋印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球的制备方法步骤如下：

a)取蛋白质BSA溶液，加入海藻酸钠，搅拌使其充分溶解，静置消去气泡成为实验中的水相；

b)按水相体积的1∶1-4∶1量取有机相，倒入容器内，向其中加入1％-5％的乳化剂和0.1％-15％的乙基纤维素，机械搅拌使其充分溶解；

c)将混合水溶液在磁力搅拌下加入到盛有机油相的容器中，常温搅拌使粘稠的混合溶液分散成微球；在磁力搅拌下向体系中加入CaCl₂溶液进行凝胶化反应；

d)静置使海藻酸钙凝胶微球沉降到容器底部，缓慢去掉上层液体，用去离子水冲洗微球，洗脱模板处理后得到蛋白质大分子包埋印迹的聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球。

所述的有机相密度为0.75-0.95g/mL，由大豆油和乙酸丁酯复配而成，乳化剂为Tween80，其质量占油相质量的1％-5％，乙基纤维素占海藻酸钠质量的0.1％-15％。

所述的大分子印迹聚乙烯基吡咯烷酮/海藻酸钙聚合物微球的制备方法，其特征是有机相和水相的体积比为1∶1-4∶1。