[发明专利]虫草多糖注射剂的制备方法及在癌症方面的用途

说明书

技术领域

本发明公开一种虫草多糖，同时提供了其制备方法，及以该化合物为活性成分的注射剂在肿瘤治疗或预防中的应用，属于中药有效成分提取及应用技术领域，也属于生化制药领域。

背景技术

本发明所称的蛹虫草(Cordyceps militaris)是生长在蛹体上的一种真菌，经鉴定为子囊菌亚门(Ascomyeotina)、麦角菌科(Clariceptaceae)、虫草属(Cordyceps)植物。据报道，蛹虫草发酵液对哮喘及支气管疾病、免疫调节、增强肾衰竭病人的肾功能等方面都有很好的治疗效果，且抗疲劳作用显著，并在抑制肿瘤方面有一定作用。国内外学者对其化学成分、生理活性进行了较系统的研究，多糖是蛹虫草的重要组成成分之一。蛹虫草多糖的生物活性与提取方法有关，提取方法不同得到的多糖结构不同，其生物活性也不同。本发明通过碱提的方法分离得到一种具有抗肿瘤活性的虫草多糖，提取的多糖部分活性强、纯度高(90％以上)，其活性虫草多糖组分在本发明之前未见报道。

发明内容

本发明提供一种具有抗肿瘤活性的虫草多糖，具有药用活性成分。

本发明还提供了从虫草菌丝体中提取上述物质的制备方法，该方法简单易行、成本较低廉，适用于工业化生产。

本发明公开的虫草多糖，可由下述方法当制备获得：

以蛹虫草菌丝体为原料，粉碎后加入石油醚回流提取1～3次脱脂，每次4小时，过滤，挥干溶媒，用20％乙醇回流提取2～3次，每次时间为3小时。过滤，将残渣加入碱液提取2～4次，每次5小时；合并滤液，用酸调pH7.0，减压浓缩后冷却，再加入4倍体积95％乙醇，4℃过夜，离心，沉淀物以无水乙醇洗涤，冷冻干燥，粉碎成细粉，得虫草多糖；

所述的碱液选自氢氧化钠、氢氧化钙、碳酸钠、碳酸氢钠。

虫草多糖的定量分析

将得到的虫草多糖干粉100mg溶于1L去离子水中制备成虫草多糖溶液，分别测定其中中性糖，酸性糖和多肽的含量。中性糖采用苯酚硫酸法，以葡糖为对照品进行测定。酸性糖采用咔唑硫酸法，以己糖醛酸为对照品进行测定。多肽采用Folin-酚法，以牛血清白蛋白为对照品进行测定。

本发明的上述方法适合于产业化大量制备具有抗肿瘤活性的多糖组分，通过化学分析证明该活性组分与以往分离的抗肿瘤活性多糖都不相同，中性多糖含量约为61.8％，酸性糖的为30.7％，其余成份为多肽类物质，上述组成的活性虫草多糖组分在本发明之前未见报道。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗肿瘤药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗宫颈癌药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗肺癌药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗口腔表皮癌药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗结肠癌药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗肝癌药物中的应用。

上述方法制备的虫草多糖在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

下述的药理实验证实了虫草多糖药物制剂具有抗肿瘤活性。

动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄兼用，购自吉林省药品检验所，动物质量合格证编号为10-1008；BALB/c小鼠，雌雄兼用，购自长春高新医学动物实验研究中心，动物质量合格证编号：10-5112。

药品：呋喃氟脲嘧啶(FT207)由山东齐鲁生产，批号：06020032；5-氟尿嘧啶(5-FU)由上海旭东海普药业有限公司生产，批号：050908；注射用环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号03070421。

癌细胞株：S₁₈₀瘤株、艾氏腹水癌细胞、A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞M、CF-7乳腺癌细胞株、U₁₄宫颈癌和肝癌腹水瘤由吉林大学第一医院提供。

实验方法与结果

1、虫草多糖注射剂对多种癌细胞系的体外抑制作用

分别用50、100、200mg/kg虫草多糖处理小鼠，制备含药血清；用0.25％胰酶消化、传代细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度至2×10⁴/ml，96孔培养板每孔加入100μl，37℃，5％CO₂孵育24h，弃培养液，加入10％过滤除菌的含药血清，37℃，5％CO₂孵育18h，采用MTT法检测细胞增殖。

表1 虫草多糖对不同癌细胞株细胞生长的影响(χ±s，n＝10)