[发明专利]新城疫病毒HN基因和F基因重组乳酸菌的构建

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域。

背景技术

1新城疫病毒的综述

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一 种极易传染家禽的毁灭性疾病，广泛流行于世界许多国家，是当今全球范围内最严重的家禽 传染病之一，因此国际兽疫局(OIE)将其与高致病性禽流感一起列为A类疫病^[1]。NDV在1926 年于爪哇首次发现，同年在英国新城(Newcastle)发现；1927年，Doyle研究证明该病是一种 由病毒引起的疫病，即用发现该病的地名命名为新城疫^[2]。我国于1948年分离到NDV，但 据载1935年曾有过“鸡瘟”的流行，可能是由NDV引起的。由于ND给世界养禽业造成的损 失巨大，故对其病原NDV的研究一直是禽病研究的重点。早期的研究集中于对NDV的生 物学特性鉴定、致病性比较及疫苗的研制和应用上。80年代以来，随着分子生物学技术的 发展与完善，对NDV基因组的组成及特征、结构蛋白与功能、致病的分子基础和新型疫苗 等方面的研究不断深入^[3]。

1.1NDV的一般生化性质

1.1.1理化性质

NDV病毒粒子含有约20％-25％(w/w)的来自宿主细胞的脂质和约6％的碳水化合物。病 毒颗粒在蔗糖中的浮密度为1.18-1.20g/ml^[4]。NDV对理化因素的抵抗力较强，能在自然界 顽固生存。影响其在宿主体外生存的主要因素包括病毒的数量、毒株的种类、温度、阳光照 射、贮存条件及是否存在有机物等。一般NDV在4℃经过几周，在-20℃经过几个月，在- 70℃经过几年仍能保持感染力。大多数去污剂能迅速将其灭活，Na₂CO₃和NaOH的消毒效 果不稳定。NDV对酸、碱的耐受力强，在pH2和pH10条件下可存活数小时。感染宿主时 病毒的毒力主要由以下几种因素引起，包括宿主类型、年龄、健康状况、环境条件以及是否 存在其他病原感染。

1.1.2生物学活性

血凝性：NDV可凝集所有两栖类、爬行类、禽类及小鼠、豚鼠的红细胞，但凝集牛、 绵羊、猪、马及人O型血红细胞的能力则随毒株或血清型的不同而异^[5]。NDV凝集红细胞 是由于其囊膜表面的HN糖蛋白与红细胞表面的受体结合所引起的。因此可通过鸡的红细胞 做血凝(HA)试验，同时结合血凝抑制(HI)试验来进行ND的抗体监测及诊断^[6]。

神经氨酸酶活性(NA)：神经氨酸酶是HN蛋白的一部分，该酶的明显作用是将病毒逐渐 从红细胞上洗脱下来，此酶还可以作用于细胞受体位点，使F蛋白充分接近细胞而发生病 毒与细胞膜的融合。

细胞的融合和溶血：和其它副粘病毒类似，NDV可引起红细胞溶解或细胞融合。在病 毒复制时，其囊膜附着于相应细胞膜的受体位点，继之囊膜与细胞膜融合，进而导致两个或 多个细胞的融合。僵硬的红细胞膜常因与病毒间的膜融合而导致溶解，产生溶血。同血凝活 性一样，细胞融合与溶血性也可被特异性抗血清所抑制。

NDV有诱导干扰素生成的作用，近期研究发现，NDV还具有抗肿瘤免疫，引起细胞凋 亡的特性^[7，8]，研究显示，NDV能选择性地杀伤肿瘤细胞，而对人的成纤维细胞没有杀伤作 用^[9]。许多人类的肿瘤细胞都能高效地被NDV感染，并独立于肿瘤细胞增殖而自我复制， 这种增殖与复制无传染性^[10]。Schinmmacher等发现NDV有促进巨噬细胞抗肿瘤活动的能 力，诱导出现抗肿瘤白细胞聚集和抗肿瘤细胞毒作用以及诱导TNF的表达，还可抑制肿瘤 细胞的转移和生长^[11]。这使NDV在肿瘤治疗及有关衰老机理的研究等方面备受重视^[12，13]。

1.2NDV的分子生物学特性

1.2.1基因组的结构